[发明专利]定量转化生长因子－β1的方法以及通过使用该方法检测癌症的方法

说明书

本发明的领域

本发明涉及一种定量一种体液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的浓度的方法，一种通过使用相同的方法检测癌症的方法，一种检测癌症的组合物，以及一种TGF-β1特异的单克隆抗体。

本发明的背景

转化生长因子β(TGF-β)调节数种细胞的生长和分化，其作用模式依赖于细胞的染色体构型和其它生长因子的存在(Sporn等.科学(Science)233，532-534(1986)；以及Roberts与Sporn.癌症研究进展(Adv.Cancer Res.)51，107-145(1998))。

在哺乳动物中存在三种形式的TGF-β因子，TGF-β1，TGF-β2，TGF-β3，并且，在这些当中，据信TGF-β1在生理机制和疾病进展中发挥关键的作用。已经报道它在一种发病过程中作用反常，例如，癌症发生。这暗示TGF-β1作为癌症诊断中的一种肿瘤标志是有用的，并且一种定量一种体液中的TGF-β1的高精度的方法在癌症诊断中可能是决定性的。

欧洲专利公开第0 722 773 A1号(EP Publication No.0 722 773 A1)公开一种通过用一种吸附剂，OH-碳酸化的羟基磷灰石，接触一种含有TGF-β1的血液样品，从而吸附其中的TGF-β1，用一种缓冲液洗脱被吸附的TGF-β1，并用紫外分光光度法确定被洗脱的TGF-β1的量的检测癌症的方法。然而，这个方法忍受着有限的敏感性和为测量值的大波动所证明的不精确的问题。

因此，已经存在一个开发一种改进的定量血浆中TGF-β1的量的方法的需要。

本发明的概述

因此，本发明的一个目的是提供一种定量一种样品中TGF-β1的量的具有高精度和敏感性的方法。

本发明的另一个目的是提供一种通过使用所说的方法检测癌症的方法。

本发明的进一步的目的是提供一种检测癌症的组合物。

本发明的又一个目的是提供一种TGF-β1特异的单克隆抗体和一种生产此单克隆抗体的杂交瘤细胞系。

根据本发明的一个方面，提供了一种定量一种样品中TGF-β1的量的方法，包括：用一种TGF-β1特异的受体处理此样品从而在TGF-β1与此受体之间形成一种复合物，并测量此复合物的量。

附图简述

本发明的上述目的和特征，从以下优选的实施方案的描述连同附图一起将变得显而易见，其中：

图1分别说明在实施例1中获得的TGF-β1III型和II型受体的光密度-TGF-β1浓度相关曲线；

图2描述从健康人，胃癌患者，肝癌患者和乳腺癌患者获得的血浆样品中各自的TGF-β1浓度分布；以及

图3描绘从健康人，肺癌患者，直肠结肠癌患者，前列腺癌患者和子宫颈癌患者获取的血浆样品中各自的TGF-β1浓度分布。

本发明的详细描述

在本发明中可以被使用的TGF-β1特异的受体包括TGF-β I型，II型，III型受体(R I，RII和RIII)，并优选TGF-β1 III型受体，RIII。这些TGF-β1受体可以根据一种常规的方法(Burand，J.P.等.病毒学(Virology)101，286-290(1980))通过在一种哺乳动物或昆虫细胞系中表达一种TGF-β1受体基因而获得。例如，此TGF-β1受体可以如下获得：用一种含有一种TGF-β1受体基因的重组杆状病毒感染一种昆虫细胞系，例如，Sf21(Invitrogen，Netherlands)；提取在此昆虫细胞中表达的不溶于水的受体蛋白；用盐酸胍或尿素溶解此不溶于水的受体蛋白；通过去除胍或尿素重新折叠被溶解的受体蛋白，从而恢复对TGF-β1的亲和力。

在本发明中可以使用的TGF-β1特异的抗体可以通过用TGF-β1或其中的一个部分免疫一种哺乳动物制备。此TGF-β1特异的抗体可以是仅对TGF-β1具有特异性的一种单克隆抗体或一种多克隆抗体。

一种定量一种体液，例如，血浆或尿中的TGF-β1的量的优选方法，根据本发明包括：

(a)将一种TGF-β1特异的受体结合到一种固体支持物上；

(b)将一种体液样品加入此被支持的受体中从而形成一种TGF-β1-受体复合物；

(c)将一种与一种标记物结合的TGF-β1特异的抗体结合到此复合物上；和

(d)使用此种作为一种检测标记的标记物测量TGF-β1的量。

在本发明中可以被使用的代表性标记物包括辣根过氧化物酶，生物素和荧光。