[发明专利]减数分裂活化甾醇增大着床率

权利要求书

1.一种包括

-至少一种减数分裂活化甾醇(MAS)，MAS是在羊毛甾醇和胆固醇之间代谢途径中任何甾醇，

-一种MAS类似物，或者

-能够内源性刺激至少一种MAS累积的添加剂或多种添加剂的培养基用于体外受精的用途，其中从体外受精产生的前成胚具有改善的体内着床率。

2.至少一种MAS，一种MAS类似物，或能够内源性刺激至少一种MAS在丘包封的卵母细胞中累积的添加剂或多种添加剂制备为体外受精培养基的用途，其中从体外受精产生的前成胚具有改善的体内着床率。

3.根据权利要求1或2的用途，其中MAS选自FF-MAS，T-MAS，1-甲基-酵母甾醇，和酵母甾醇。

4.根据前述权利要求中任何一项的用途，其中MAS是FF-MAS。

5.根据前述权利要求中任何一项的用途，其中MAS是T-MAS。

6.根据权利要求1或2的用途，其中培养基包括一种MAS类似物。

7.根据权利要求1或2的用途，其中该添加剂或多种添加剂导致在存在该添加剂或多种添加剂的条件下培养的丘包封的卵母细胞中MAS的相对含量之间至少为2的比值，该培养的丘包封的卵母细胞中MAS的相对含量通过如下方式测定：在从小鼠去除卵巢之前48小时用外源的促性腺激素刺激雌性小鼠，通过穿刺单个卵泡从卵巢回收丘包封的卵母细胞，并在补充了3mg/l牛血清白蛋白，5mg/ml人血清白蛋白，2mM L-谷氨酰胺，100IU/ml青霉素，100μg/ml链霉素，4mM次黄嘌呤和³H-mevalonat的α-MEM培养基中在37℃，100％湿度和含有5％CO₂的空气中培养24小时，此后用50μl 3M Na₂PO₄ pH＝1酸化，用5倍过量的正庚烷∶异丙醇(3∶1v/v)有机萃取三次，利用HPLC从有机相纯化MAS，并测定在存在此添加剂或多种添加剂的条件下培养的丘包封的卵母细胞和不存在此添加剂或多种添加剂的条件下培养的丘包封的卵母细胞之间每个丘包封的卵母细胞的放射性的比值。

8.根据权利要求7的用途，其中此添加剂选自诸如FSH和类似物的促性腺激素，诸如EGF和类似物的生长激素，诸如A9944-A7的抑制甾醇Δ14-还原酶的化合物，抑制将T-MAS转变成酵母甾醇的4-脱甲基酶的化合物，活化细胞色素P450羊毛甾醇14α-脱甲基酶的化合物和有两性霉素样作用的化合物。

9.根据权利要求8的用途，其中此添加剂是一种促性腺激素和一种生长激素的联合。

10.根据权利要求9的用途，其中此添加剂是EGF和FSH的联合。

11.根据权利要求8的用途，其中此添加剂是EGF。

12.根据权利要求8的用途，其中此添加剂是FSH。

13.根据权利要求10或12的用途，其中FSH是一种具有大于5.0的等电点的FSH同工型。

14.根据权利要求10，12或13的用途，其中此FSH衍生于天然存在的FSH，例如从尿提取的FSH，或来自FSH的。

15.根据权利要求10或12-14的用途，其中FSH的浓度是在2和200IUFSH/l之间。

16.根据权利要求10或11的用途，其中EGF的浓度是在1和10ngEGF/ml之间。

17.根据权利要求7或8的用途，其中此添加剂是两性霉素。

18.根据前述权利要求中任何一项的用途，其中体外受精是人卵母细胞的体外受精。

19.一种体外受精的方法，包括步骤：将一个或多个MII卵母细胞与精子一起暴露和培养于一种培养基中，此培养基包括至少一种MAS，一种MAS类似物或能够内源性刺激至少一种MAS累积的添加剂或多种添加剂；持续此暴露和培养直至形成了受精卵和/或前成胚。