[发明专利]控制OmpT蛋白酶切割的方法

权利要求书

1．控制OmpT蛋白酶对多肽进行切割的方法，它包括将所述多肽中由两任意连续氨基酸组成的序列位点和/或所说位点附近的氨基酸转换成其它氨基酸，其特征在于，(1)设置赖氨酸或精氨酸为相对于所说位点为-1位置处的氨基酸，设置特异氨基酸为+1位置处的氨基酸；和/或(2)设置特异氨基酸为相对于所说位点为-4和/或-6位置处的氨基酸；以便所说多肽的合乎需要部分被OmpT蛋白酶切割和/或所说多肽的不合乎需要部分不(或几乎不)被OmpT蛋白酶切割。

2．权利要求1的方法，其特征在于，如果所说多肽中由两任意连续氨基酸组成之序列位点的-1位置的氨基酸既非赖氨酸也非精氨酸，则将所说氨基酸转换成赖氨酸或精氨酸，并将+1位置的氨基酸设置为氨基酸X(其中X是除谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、精氨酸、赖氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸之外的氨基酸)，以便多肽的合乎需要部分被OmpT蛋白酶切割。

3．如权利要求1的方法，它包括，在具有由OmpT蛋白酶可切割之两任意连续氨基酸组成的序列位点的多肽中，将所说位点的氨基酸和/或其附近的氨基酸转换成其它氨基酸，其特征在于(1)设置赖氨酸或精氨酸为相对于所说位点为-1位置处的氨基酸，设置特异氨基酸为+1位置处的氨基酸；和/或(2)设置特异氨基酸为相对于所说位点为-4和/或-6位置处的氨基酸；以便所说多肽的合乎需要部分可被OmpT蛋白酶切割。

4．如权利要求3的方法，它包括，在具有由OmpT蛋白酶可切割之两任意连续氨基酸组成的序列位点的多肽中，将所说位点的氨基酸和/或其附近的氨基酸转换成其它氨基酸，其特征在于(1)设置赖氨酸或精氨酸为相对于所说位点为-1位置处的氨基酸，设置氨基酸X(其中X是除谷氨酸、天冬氨酸或脯氨酸之外的氨基酸)为+1位置处的氨基酸；和/或(2)设置氨基酸X(其中X是除酸性氨基酸之外的氨基酸)为所说序列中-4和/或-6位置处的氨基酸。

5．权利要求1、3或4的方法，其特征在于，-4和/或-6位置处的氨基酸是碱性氨基酸。

6．权利要求5的方法，其特征在于，-4和/或-6位置处的氨基酸是赖氨酸或精氨酸。

7．权利要求1的方法，它包括，在具有由OmpT蛋白酶可切割之两任意连续氨基酸组成的序列位点的多肽中，将所说位点的氨基酸和/或其附近的氨基酸转换成其它氨基酸，其特征在于(1)设置赖氨酸或精氨酸为相对于所说位点为-1位置处的氨基酸，设置特异氨基酸为+1位置处的氨基酸；和/或(2)设置特异氨基酸为相对于所说位点为-4和/或-6位置处的氨基酸；以便所说多肽的不合乎需要部分不(或几乎不)被OmpT蛋白酶切割。

8．如权利要求7的方法，它包括，在具有由OmpT蛋白酶可切割之两任意连续氨基酸组成的序列位点的多肽中，将所说位点的氨基酸和/或其附近的氨基酸转换成其它氨基酸，其特征在于(1)设置赖氨酸或精氨酸为所说位点-1位置处的氨基酸，设置氨基酸X(其中X是谷氨酸、天冬氨酸或脯氨酸)为+1位置处的氨基酸；和/或(2)设置酸性氨基酸为所说序列中-4位置和/或-6位置处的氨基酸。

9．如权利要求1-8中任一项的方法，包括在宿主细胞中表达基因，该基因编码由通过切割位点(任选地位于连接肽中)与保护肽融合之靶多肽组成并在所说切割位点处可被OmpT蛋白酶切割的融合蛋白质，用OmpT蛋白酶在所说切割位点处切下蛋白质，从而从所说的融合蛋白质中获得靶多肽。

10．如权利要求9的方法，其中OmpT蛋白酶可切割之氨基酸序列存在于组成所说融合蛋白质之保护肽、连接肽和/或靶多肽的氨基酸序列中。

11．生产靶多肽的方法，它包括在宿主细胞中表达基因，该基因编码由通过切割位点(任选地位于连接肽中)与保护肽融合之靶多肽组成并在所说切割位点处可被OmpT蛋白酶切割的融合蛋白质，以及通过OmpT蛋白酶在所述切割位点处切割蛋白质从而从所述融合蛋白质获得靶多肽，其特征在于如权利要求1-8中任一项所述转换所说切割位点处的氨基酸和/或所说位点附近的氨基酸。

12．如权利要求11的方法，其中OmpT蛋白酶可切割之氨基酸序列存在于组成所说融合蛋白质之保护肽、连接肽和/或靶多肽的氨基酸序列中。