[发明专利]从活性血多肽中分离的活性单肽、其制备工艺、活性及序列

说明书

本发明公开了一种活性肽及其制备方法，特别是从活性血多肽-小牛血去蛋白提取物中分离的活性单肽及其制备方法、活性检测和序列分析以及该活性肽的用途。

肽是一类生物活性物质。它涉及激素神经细胞生长和生殖等多个领域，其重要性在于调节体内各系统、器官和细胞的功能活动。生物活性肽的研究是当前生物学研究中最活跃的领域之一。二十世纪六、七十年代，垂体和下丘脑的一些肽类激素分离纯化取得重大突破，七十年代中期内源性阿片肽的分离纯化取得成功，极大的推动了神经肽研究的发展。已经发现众多生物活性肽，如神经肽、脑肠肽、心房肽等等，广泛参与生物体的各种功能活动的调节，引起各相关学科的注意。在生物活性肽的研究中，极其重要而且必不可少的内容就是肽的分离纯化工作，但由于肽不但本身结构复杂，而且所处的环境往往是含有各种各样大分子的混合物，因此肽的分离纯化一直是生物学工作者十分关注长期研究的课题。

生物活性肽一般所处的环境往往是各种各样大小分子的混杂体，分离纯化的目的是为了进一步研究其组成、结构、生物活性、功能和作用机理等，并进一步通过人工合成的方法合成这种肽。肽含量非常低，因此至今没有一个单独或一套现成的方法能把任何一种多肽从复杂的混合物中提取出来。

在生物活性肽的分离纯化述程中，关键的步骤是建立自始至终都要用的生物活性测定方法，且该测活方法始终是可信的，以保证纯化出能在测活实验中给出信号的来西。分离纯化肽的基础主要是利用分子之间各种特性的差异，如分子的大小和形状、酸碱性质、溶解度、吸附性质和对其它分子的生物学亲和力。现用于纯化肽的分离纯化模式主要有三种：一是凝胶色谱，按肽分子的大小进行分离；二是离子交换色谱，按肽分子所具有的带电基因的性质数目进行分离；三是反相色谱，按肽分子的疏水强弱进行分离。从成分极其复杂的混合物中将肽分离出来，常常可利用化合物分子的不同特性(体积、带电性、疏水性)连续选用几种模式的色谱方法以达到有效的分离纯化。但是每一步的分离过程中总有部分样品不可避免地损失掉，如肽的浓度很低时应避免分离步骤过多。正确的实验设计是选用最少的分离步骤达到最佳的分离效果。所以对于多步骤的分离程序。要选择柱子的种类及使用顺序非常重要。对于每一种肽应该选择一套适当的分离纯化模式以获得高纯度高活性的纯品。例如在“高效液相色谱在生命科学中的应用，科学技术文献出版社，1998”中，公开了利用凝胶色谱、离子交换色谱和反相色谱在选择性上的差异，采用凝胶色谱(Bio-Rad250)、离子交换柱(SynChropakS300)、反相柱(SgnChropak RP-C18)，从免骨路肌肌钙蛋白中完全分离出所需要的肽分子片段。

活性血多肽的种类很多，一般是从动物的血液中分离提纯出来的，如小牛血去蛋白提取物(Deproteinized Hemoderivation Calfblood)是以小牛血为原料，分子量小于5000道尔顿的小分子生物活性制剂。

小牛血去蛋白提取物(血活素)1955年由瑞士素高药厂(SOLCOBASLE A.G.)首先研制开发出来，在世界各国已广泛应用多年，目前主要上市产品有奥地利奈科明药厂(HAFSLUND NYCOMEDAG)爱维治(Actovegin)和瑞士素高药厂生产的素高捷疗(Solcoseryl)，以及由日本和我国的众多生产厂家生产的产品。其制剂有注射液、片剂、眼膏、冻膏等，注射液每毫升含有40-50mg小牛血去蛋白提取物。

小牛血去蛋白提取物的主要药理作用是促进细胞对氧和葡萄糖的摄取和利用(不依赖于胰岛素)，该作用在功能缺陷、代谢受抑的情况(低血氧、基质不足)下和能量需求增加时尤为突出，使葡萄糖的无氧代谢转向有氧代谢，促使能量物质生成增多，延长细胞生成时间，促进组织细胞代谢及功能恢复和组织修复。作为脑代谢复活剂，主要用于治疗老年性痴呆(包括Alzheimer病、多梗塞性痴呆等)、急、慢性脑血管疾病，特别是中风、颅脑外伤、脊髓的一些病症、脑创伤、脑器质性精神障碍、外周血管闭塞疾病，此外，也用于治疗各种类型的伤口、溃疡创面、烧伤、化学灼伤、放射性损伤等，具有良好的临床疗效。