[发明专利]从活性血多肽中分离的活性单肽、其制备工艺、活性及序列

权利要求书

1.一种活性单肽，其特征在于高效毛细管区带电泳鉴定纯度大于95％，高效液相凝胶色谱法测定分子量为803道顿，紫外吸收光谱中190-220nm有强烈的吸收，液相二级质谱测定碎片为589.2、545.2、403.1、346.1、244.2和187.2，瓦氏呼吸仪测压法测得相对活性49.6％，能促进豚鼠肝细胞对氧的摄取和利用，是小牛血去蛋白水解液注射液中的有效成分。

2.权利要求1活性单肽的制备方法，其特征在于由活性血多肽经过中低压液相色谱、C18及C4反相色谱、CN及Silica正相色谱多步分离纯化，分离过程中每一步用瓦氏呼吸仪测压法跟踪测定分离样品的相对活性测定，取活性最大的成分进行进一步分离，得到活性血的活性单肽成分。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于中低压液相色谱分离过程中，采用中低压液相色谱仪，HiLoad 16/60 Superdex柱，流动相为10％乙腈＋0.1％TFA的水溶液，流速为1.2ml/min，柱温为室温，检测波长为214nm。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于高效反相液相色谱分离过程中，采用高效液相色谱仪，Zorbax 300SB-C18柱，流动相A液：0.1％TFA的水溶液，PH值25，0.45μm滤膜过滤，用前超声脱气；流动相B液：0.1％TFA＋80％乙腈的水溶液，检测波长214nm，柱温37℃，进样体积500μl，梯度洗脱，按时间收集，

洗脱梯度：    时间(min)   流速(ml/min)    B％

                0.00           2.00        0

               10.00           2.00       10

               15.00           2.00       20

               53.00           2.00       100

               40.00           2.00       100

               50.00           2.00         0

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于高效反相液相色谱分离过程中采用高效液相色谱仪，Vydac 300SB-C4柱，流动相A液：0.1％TFA＋20％乙腈的水溶液(PH值2.80)；流动相B液：0.1％TFA的乙腈溶液，检测波长214nm，柱温37℃，进样体积50μ1，梯度洗脱，按时间分段收集。

洗脱梯度：    时间(min)    流速(ml/min)    B％

                 0.00           1.00        0

                 5.00           1.00        0

                15.00           1.00       55

                25.00           1.00       65

                30.00           1.00       65

             35.00    1.00    100

             40.00    1.00    100