[发明专利]具有造血刺激和免疫调节作用的细胞因子CKLF－H1A及其变异体CKLF－H1B

说明书

本发明涉及生物工程领域，具体地说是一个新的细胞因子CKLF-H1A及其变异体CKLF-H1B的核酸编码序列与氨基酸序列，携带CKLF-H1A、B核酸序列的载体，表达CKLF-H1A、B的宿主细胞，含有CKLF-H1A、B的药物组合物，CKLF-H1A、B的抗体及拮抗剂，以及细胞因子CKLF-H1A、B在制备治疗造血系统疾病和免疫系统疾病的药物组合物中的用途。

细胞因子是由机体内细胞合成并分泌的、参与多种细胞的增殖分化，在机体的生理和病理过程中发挥重要作用的小分子多肽的总称。细胞因子包括白细胞介素、集落刺激因子、干扰素、肿瘤坏死因子、生长因子和趋化因子等。细胞因子具有等多种生理功能：它们可以调节机体的免疫功能，参与刺激造血干细胞的增殖与分化，促进血管内皮细胞增殖和新生血管生成、在抗肿瘤和抗微生物感染方面也具有重要意义。近年来，随着分子生物学技术的不断发展，人们对细胞因子及其受体的结构功能，细胞因子的信号传导和表达调控有了更深入的了解，利用基因工程技术生产重组的细胞因子或其拮抗剂已经作为药物用于临床，并取得良好疗效。例如髓样造血祖细胞抑制因子(MPIF-1)作为造血保护剂被用于肿瘤的大剂量放、化疗中，有望成为新一代的生物工程药物(Marshall A，HGS Launches“first”genomics product in clinic.NatBiotechnol 1998，16：129)。这提示细胞因子在肿瘤、造血功能障碍性疾病、自身免疫性疾病等疑难病症的治疗中具有广阔的应用前景。

细胞因子CKLF-H1A、B(Chemokine Like Factor Homologue 1A、B，简称CKLF-H1A、B)的基因是本发明人通过分析表达序列标签(EST)发现的，该基因与已知基因的核苷酸序列无明显的同源性。本发明人在原核和真核细胞中成功地表达了该多核苷酸编码的的CKLF-H1A、B多肽。

本发明的第一个目的是提供编码细胞因子CKLF-H1A、B的多核苷酸序列。

本发明的第二个目的是提供带有CKLF-H1A、B核酸序列的载体。

本发明的第三个目的是提供经携带CKLF-H1A、B核酸序列的载体转染、转化或转导过的宿主细胞。

本发明的第四个目的是提供用基因工程手段生产CKLF-H1A、B成熟多肽的方法。

本发明的第五个目的是提供细胞因子CKLF-H1A、B的氨基酸序列。

本发明的第六个目的是提供含有CKLF-H1A、B的药物组合物。

本发明的第七个目的是提供CKLF-H1A、B的单克隆或多克隆抗体。

本发明的第八个目的是提供CKLF-H1A、B的拮抗剂。

本发明的第九个目的是提供CKLF-H1A、B的激活剂

本发明的第十个目的是提供CKLF-H1A、B在制备具有造血刺激活性和免疫调节作用的药物组合物中的用途。

本发明是通过如下的技术方案实现的。本发明人通过抑制性递减杂交技术(SSH)发现了趋化素样因子(CKLF-1)的基因(详见中国专利99107284.7)。发明人进而以CKLF-1的核苷酸序列为基础，通过EST Assembly machine(网址为http：//www.tigenm.it)进行表达序列标签(Expression Sequence Tag，简称EST)分析，得到了全长700bp的cDNA序列，通过设计特异性上游引物P1(5’-GCG ATC CAA AGA GCG CGT -3’)和下游引物P2(5’-TCT CGA TAA AAGCAG CAG CCC-3’)从正常人的cDNA文库中扩增，分离并克隆出细胞因子CKLF-H1A、B的基因(Chemokine Like Factor Homologue 1A、B，以下简称CKLF-H1A、B)。经检索，CKLF-H1的核苷酸序列是新序列。

根据本发明的第一个方面，本发明公开了CKLF-H1A的和CKLF-H1B的核酸序列。CKLF-H1A与CKLF-H1B分别编码具有149个氨基酸(Aa)和94个氨基酸(Aa)的成熟多肽，分别如SEQ ID NO：2与SEQ ID NO：4所示。SEQ ID NO：1编码的成熟多肽具有菌种保藏号CGMCC NO.0456.1中的DNA所表达的氨基酸序列；SEQ ID NO：3编码的成熟多肽具有菌种保藏号CGMCC NO.0456.2中的DNA所表达的氨基酸序列。