[发明专利]一种中国人白细胞介素－18亚型(53ArgIL－18)的基因克隆、产物的制备及应用无效
| 申请号： | 00107993.X | 申请日： | 2000-06-07 |
| 公开（公告）号： | CN1326992A | 公开（公告）日： | 2001-12-19 |
| 发明（设计）人： | 徐明波;王勇波;黄向东;赵冰 | 申请（专利权）人： | 北京双鹭药业有限责任公司 |
| 主分类号： | C07K14/54 | 分类号： | C07K14/54;C12N15/63;A61K38/20;A61P35/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100041 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 中国人 白细胞 18 53 argil 基因 克隆 产物 制备 应用 | ||
【权利要求书】：
1、一种重组人白细胞介素-18亚型(53Arg IL-18)的制备方法，包括PCR引物设计、扩增的基因、表达质粒的构建、表达产物的纯化工艺，其特性在于：
(1)采用自行设计的PCR引物，自中国人外周血单个核细胞中克隆出53ArgIL-18的cDNA片段；
(2)上述IL-18 cDNA与含有PL、PR启动子的原核表达载体pBV220组装成高效表达质粒pIL-18；
(3)plL-18转化大肠杆菌，用温度诱导IL-18基因的表达，产物以包涵体形式存在工程菌内；
(4)通过发酵技术扩增工程菌，用2YT作基础培养基，在表达不同时机加氮源、碳源等营养素；
(5)发酵后破碎菌体，纯化包涵体并用尿素溶解变性，随后采用凝胶排阻层析和阴离子交换层析二步法纯化产品，两步之间进行分子复性。
2、根据权利要求1制备的人IL-18纯品加入甘氮酸等稳定剂和助溶剂后，无菌过滤、分装、冻干后制成成品，保存于2∽8℃的冷藏环境中。
3、根据权利要求1、2所述的药物制剂，可以用于治疗癌症。
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