[发明专利]直接通过底物再加载进行的酶活性筛选

摘要

从催化剂分子的一个文库中体外筛选目的催化剂分子的一种方法,与所述文库中其余催化剂分子比较,所筛选的分子具有相对更有效的所需特异性催化活性,并且其中所述体外筛选方法特征在于,它允许该目的催化剂分子在最后被收集以前多次催化活性的转换(即底物到产物的催化活性的转换)。该方法的基础在于利用一种或多种试剂,所指试剂能够将目的催化剂分子产生的一种产物转换成所述目的催化剂的底物。

主权项

1．一种从催化剂分子库体外筛选感兴趣的催化剂分子的方法，该催化剂分子与所述库中其他催化剂分子比较具有相对更有效的所需特异性催化活性并且其中所述体外筛选的方法特征在于，其在目的催化剂分子被最终收集以前允许多次催化活性转换(即，底物到产物的催化活性转换)，并且其中所述方法包括以下步骤，(ⅰ)放置含数个独立单位的样品，所述样品包括以独立单位形式提供的催化剂分子库，所述独立单位包含具有以下通式的第一类独立单位：C-S，其中C表示催化剂分子，而S表示能所述催化剂分子库中至少一种催化剂催化成产物的底物，并且因此能获得含有以下通式的第二类独立单位：C-P，其中C如上定义，而P第一类独立单位的底物S经催化而转化来的产物分子；并且(a)该底物S以一种可使所述独立单位内催化剂与底物之间发生催化反应的构像附着于催化剂上；并且(b)该底物与催化剂的附着特性使得可利用该产物的特点分离一种实体，该实体包含对能催化底物分子到产物分子之反应的催化剂分子进行明确鉴定所需的信息；前提是，目的催化剂分子表现其所需催化活性，且所述方法特征在于所述样品还处于使目的催化剂产生的产物与将其转换回底物S的一种或者多种试剂接触的条件下；(ⅱ)通过筛选一或多个含该产物分子的独立单位而筛选目的催化剂；并且(ⅲ)利用该产物的特点分离一种实体，该实体包含对能多次催化底物到产物之反应的目的催化剂分子进行明确鉴定所需的信息；和任选地(ⅳ)利用包含在步骤(ⅲ)所述实体中的信息重复步骤(ⅰ)～(ⅲ)一次或多次，以产生目的催化剂分子，并构建含该目的催化剂分子的独立单位，然后用该独立单位作为所述重复步骤的起始物。