[发明专利]一种从含有无活性蛋白的溶液中回收生物活性形式重组蛋白的方法无效
| 申请号： | 93108052.5 | 申请日： | 1993-07-01 |
| 公开（公告）号： | CN1039330C | 公开（公告）日： | 1998-07-29 |
| 发明（设计）人： | Ｅ·李;Ｄ·Ａ·施维拉;Ｒ·Ｄ·杨 | 申请（专利权）人： | 皮特曼－穆尔有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/113 | 分类号： | C07K1/113;C07K14/61 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 | 代理人： | 姜建成,汪洋 |
| 地址： | 美国印*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种从含有无活性蛋白的溶液中制取天然生物活性形式重组蛋白的方法，无活性蛋白以不溶性包涵体或氧化的、错误折叠的和聚集的无用蛋白形式存在，该方法包括用第一碱性缓冲液稀释无活性蛋白溶液，加入ＳＤＳ和Ｌ－半胱氨酸以同时溶解和还原该蛋白，相对第二碱性缓冲液进行透滤使ＳＤＳ和Ｌ－半胱氨酸的浓度下降约７０％—９０％，氧化已变性和还原的蛋白以形成与天然存在的生物活性蛋白一致的二硫键。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 有无 活性 蛋白 溶液 回收 生物 形式 重组 方法 | ||
【主权项】：
1.一种从含有无生物活性蛋白的溶液中制取天然生物活性形式重组蛋白的方法，该方法包括下列步骤：a)用浓度为35mM～60mM、pH值为9-11的第一碱性缓冲液稀释无活性蛋白溶液；经缓冲液稀释后，无活性蛋白的浓度为0.1-1.0mg/ml；b)用作为变性剂的SDS和作为还原剂的L-半胱氨酸处理稀释后的蛋白，以同时溶解和还原所说的蛋白，所述变性剂的浓度在0.05～1.0％重量/体积范围内，所述还原剂L-半胱氨酸的浓度在5mM～40mM的范围内；c)通过相对于浓度为35mM～60mM、pH值为9-11的第二碱性缓冲液进行透滤，使所得到的溶液中SDS和L-半胱氨酸的浓度下降70％至90％；和d)在空气存在下，氧化(c)步骤的已变性和还原的蛋白，以形成与天然存在的生物活性蛋白一致的二硫键。
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