[发明专利]一种从含有无活性蛋白的溶液中回收生物活性形式重组蛋白的方法

权利要求书

1.一种从含有无生物活性蛋白的溶液中制取天然生物活性形式重组蛋白的方法，该方法包括下列步骤：

a)用浓度为35mM～60mM、pH值为9-11的第一碱性缓冲液稀释无活性蛋白溶液；经缓冲液稀释后，无活性蛋白的浓度为0.1-1.0mg/ml；

b)用作为变性剂的SDS和作为还原剂的L-半胱氨酸处理稀释后的蛋白，以同时溶解和还原所说的蛋白，所述变性剂的浓度在0.05～1.0％重量/体积范围内，所述还原剂L-半胱氨酸的浓度在5mM～40mM的范围内；

c)通过相对于浓度为35mM～60mM、pH值为9-11的第二碱性缓冲液进行透滤，使所得到的溶液中SDS和L-半胱氨酸的浓度下降70％至90％；和

d)在空气存在下，氧化(c)步骤的已变性和还原的蛋白，以形成与天然存在的生物活性蛋白一致的二硫键。

2.根据权利要求1的方法，其中步骤(a)和(c)中的缓冲液的浓度为40mM至50mM，pH值为9.6至10。

3.根据权利要求1的方法，其中在步骤(a)的缓冲液稀释后，无活性蛋白的浓度为0.3mg/ml至0.6mg/ml。

4.根据权利要求1的方法，其中变性剂为0.2％SDS。

5.根据权利要求1的方法，其中还原剂为15mM的L-半胱氨酸。

6.根据权利要求1的方法，其中所说的SDS和L-半胱氨酸浓度的下降是通过相对于0.5至3倍体积的所说第二缓冲液进行透滤而发生的。

7.根据权利要求1的方法，其中蛋白质为生长激素。

8.根据权利要求7的方法，其中生长激素为牛、猪、鸟、羊或人生长激素。

9.根据权利要求8的方法，其中生长激素为猪生长激素。

10.根据权利要求1的方法，其中所说的无活性蛋白以不溶性包涵体形式存在。

11.根据权利要求1的方法，其中所说的无活性蛋白是氧化的、错误折叠的和聚集的无用蛋白。