[发明专利]一种包含人NGLY1基因的重组质粒、工程菌以及人工NGLY1的制备方法和检测方法

摘要

本发明涉及人NGLY1基因和人工NGLY1技术领域，尤其涉及一种包含人NGLY1基因的重组质粒、工程菌以及人工NGLY1的制备方法和检测方法，一种检测人工基因突变体NGLY1活性的检测方法，包括以标准N‑糖蛋白RNase B为底物，以人工正常NGLY1为对照，具体步骤如下：步骤1）底物变性：将RNase B置于恒温金属浴中，80‑100℃，5‑10 min使RNase B变性；步骤2）酶切反应：1~2μg热变性后的RNase B冷却至室温后，分别加入1~2μg纯化后的人工基因突变体NGLY1和对照组的人工正常NGLY11‑2μg/μL，定容20~30μL，在35~37℃下水浴反应8‑12 h；步骤3）取反应产物用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法SDS‑PAGE及质谱MALDI‑TOF·MS鉴定。