[发明专利]一种树舌转基因方法在审

专利信息
申请号: 202111395277.5 申请日: 2021-11-23
公开(公告)号: CN114085862A 公开(公告)日: 2022-02-25
发明(设计)人: 林景卫;梁耕源;白玉东;范天宁;陈焕;李守坤;王浩安;郭芡芡;申玉华;陈罡;高英旭;范俊岗 申请(专利权)人: 沈阳农业大学
主分类号: C12N15/80 分类号: C12N15/80;C12N1/15;C12R1/645
代理公司: 成都华复知识产权代理有限公司 51298 代理人: 王洪霞
地址: 110000 辽宁省沈*** 国省代码: 辽宁;21
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摘要: 发明公开了一种树舌转基因方法,属于生物领域,首先制备培养基,包括包括YPG培养基、MYG再生培养基,然后构建重组真核表达质粒载体:pCAMBIA1303‑pGPD‑FIP‑gap,然后取纯化后的1×107个树舌原生质体,悬浮于250μL渗透压稳定剂,加入5μg质粒pCAMBIA1303‑pGPD‑FIP‑gap轻轻摇匀,然后放置于冰上冰浴10min;接着加入50μL PEG缓冲液,置于冰上冰浴30min,再加入1mL的PEG缓冲液,混匀在28℃下静置20min;所述PEG缓冲液包括PEG6000、15mM CaCl2和10mM Tris水溶液,经过再生培养、潮霉素抗性筛选、传代培养后最后进行检测,结果显示经过两次潮霉素抗性筛选的转化子均为阳性,PCR阳性检测结果:10%‑60%的PEG缓冲液均可得到阳性转化子,其中用30%的PEG缓冲液进行树舌转化效率最好,1μg质粒可以获得110‑120个左右阳性转化子,阳性转化率可达95%。
搜索关键词: 种树 转基因 方法
【主权项】:
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