[发明专利]一种能高效表达LL-37多肽的多拷贝重组表达载体及应用

摘要

本发明公开了一种能高效表达LL‑37多肽的多拷贝重组表达载体、重组毕赤酵母、构建方法及应用，本发明以PPICZα为骨架质粒来构建重组表达载体，所述的重组表达载体PPICZα包括信号肽α因子、拷贝的LL‑37序列。多拷贝重组载体质粒是用双酶切目标片段后进行回收、沉淀和连接，得到多拷贝的质粒；同时用BamH I线性化重组质粒pPICZαA‑LL‑37；乙醇沉淀法进行纯化，把多拷贝质粒与载体相连接，再与毕赤酵母电转化为感受态细胞。通过诱导表达产生目标蛋白；利用本发明的重组酵母能够有序合成并将目标蛋白分泌到胞外，产生与人源抗菌肽LL‑37相同功能的结构多肽。经过测量抑菌圈和最小抑菌浓度，检测LL‑37的活性。本发明得到的LL‑37具有广谱抗菌性，能够抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。