[发明专利]一种不依赖PCR反应的短片段克隆方法

摘要

本申请属于生物工程技术领域，具体涉及一种不依赖PCR反应的短片段快速克隆方法。该方法包括：线性化载体、设计并合成两条部分互补的长链寡核苷酸序列、制备目的序列、同源重组、转化、筛选，获得重组载体等步骤。本申请中，发明人对现有重组反应中目的片段的制备方法进行了进一步改进，利用单链重组方式延长了插入序列的长度，并利用大肠杆菌的天然修复系统完成了双链补全，从而达到短片段快速克隆目的。该发明保留了现有重组方法简单快捷的技术特点，同时兼具了现有连接方法在连接长度方面的技术优势。可为重组质粒改造（例如酶切位点改造、蛋白表达标签的添加等）奠定良好的技术基础。