[发明专利]基于CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除猪miR-155基因的细胞系及构建方法在审
| 申请号： | 202011331839.5 | 申请日： | 2020-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN112481218A | 公开（公告）日： | 2021-03-12 |
| 发明（设计）人： | 李聪聪;谢胜松;李婉涛;张永辉;张慧慧;赵婉霞;石珍珍;刘思雨;刘海龙;姜东凤;韩浩园;牛晖 | 申请（专利权）人： | 河南牧业经济学院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/113;C12N15/85 |
| 代理公司： | 河南豫龙律师事务所 41177 | 代理人： | 游国战 |
| 地址： | 450046 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明提供一种基于CRISPR/Cas9基因编辑系统的敲除猪miR‑155基因的细胞系及其构建方法，涉及基因工程技术领域，本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9基因编辑系统的敲除猪miR‑155基因的细胞系及其构建方法，该细胞系采用以下步骤制备：根据猪miR‑155基因的前体序列及成熟体序列设计优选sgRNA向导序列；将sgRNA39 F和sgRNA39 R序列退火形成双链DNA，将DNA与线性化pKLV2‑U6gRNA5(gGFP)‑PGKBFP2AGFP‑W载体连接获得重组质粒，与慢病毒包装质粒PSPXA2、PMD2.G稳定转染HEK293T细胞包装成慢病毒；收集浓缩病毒感染稳定表达Cas9蛋白的猪肺泡巨噬细胞系（3D4/21），通过无限稀释或流式分选的方法挑取单克隆细胞，扩大培养成细胞系，建立猪miR‑155基因敲除的细胞系，为进一步进行抗病候选基因miR‑155的功能研究提供有效的细胞研究模型。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 crispr cas9 基因 编辑 系统 mir 155 细胞系 构建 方法 | ||
【主权项】：
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