[发明专利]一种不需要预包被的神经元细胞培养方法在审
| 申请号： | 201911110826.2 | 申请日： | 2019-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN110713981A | 公开（公告）日： | 2020-01-21 |
| 发明（设计）人： | 何江虹;谷苗;王澍;王钰;顾晓松 | 申请（专利权）人： | 南通大学 |
| 主分类号： | C12N5/0793 | 分类号： | C12N5/0793 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 226019*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞生物学技术领域，公开了一种不需要预包被的神经元细胞培养方法。本发明首先对蝶翅进行处理使其呈现透明和亲水性，并保持其原有的表面结构，然后将蝶翅用作神经元培养基质材料进行神经元细胞培养，可以不用预先采用多聚赖氨酸等促粘附试剂包被，就可以直接将分离获得的原代神经元在蝶翅表面进行培养，经光学显微镜、扫描电子显微镜、激光共聚焦显微镜等多种显微镜镜下观察拍照，可见神经元生长状态良好，存活率高。 | ||
| 搜索关键词： | 蝶翅 神经元细胞培养 激光共聚焦显微镜 神经元 扫描电子显微镜 细胞生物学技术 多聚赖氨酸 光学显微镜 神经元培养 神经元生长 表面结构 基质材料 存活率 亲水性 试剂包 预包被 原有的 粘附 显微镜 拍照 透明 观察 | ||
【主权项】：
1.一种不需要预包被的神经元细胞培养方法，其特征在于，采用蝶翅作为神经元细胞培养基质材料，包括以下步骤：/nS1.将蝶翅以1mol/L的HCl溶液浸没浸泡3小时，双蒸水漂洗多次至PH试纸检测溶液呈中性；/nS2.将步骤S1处理得到的蝶翅用2mol/L的NaOH溶液浸没蝶翅，40-60°烘箱中放置12-16小时，至蝶翅接近透明，双蒸水漂洗至PH试纸检测溶液呈中性；/nS3.将步骤S2处理得到的蝶翅在75％乙醇溶液中浸泡消毒灭菌，然后在超净工作台中无风状态紫外线照射15分钟消毒灭菌；/nS4.将步骤S3处理得到的蝶翅以灭菌双蒸水漂浮，按培养器皿及实验需求剪出所需性状大小的蝶翅作为细胞培养基质，将所述细胞培养基质转移至滴有灭菌水的玻片或装有灭菌水的培养器皿中使其漂浮铺展，从边缘吸去所述细胞培养基质下方的水，使所述细胞培养基质在玻片或培养器皿表面平整铺展；/nS5.将步骤S4处理得到的铺展有所述细胞培养基质的玻片或培养器皿在超净台中无风干燥5分钟后，吸取热的液体状的琼脂在蝶翅边缘筑坝一圈，使冷却后的琼脂将所述细胞培养基质封固在玻片或培养器皿上并在所述细胞培养基质周围边缘处形成坝体；/nS6.将神经元细胞悬液滴加于所述细胞培养基质表面所述坝体的内部区域，然后置于37°二氧化碳培养箱内培养。/n
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