[发明专利]一种基于免疫微球的循环肿瘤细胞明场负向鉴定方法在审
| 申请号： | 201910929530.7 | 申请日： | 2019-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN110726838A | 公开（公告）日： | 2020-01-24 |
| 发明（设计）人： | 张南刚;李颖;蔡仕嘉;汤曼;刘侃 | 申请（专利权）人： | 武汉纺织大学 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N33/543 |
| 代理公司： | 42001 武汉宇晨专利事务所 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430200 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及循环肿瘤细胞鉴定技术，尤其涉及一种基于免疫微球的循环肿瘤细胞明场负向鉴定方法，属生物工程技术领域。本发明采用的是利用免疫微球特异性识别白细胞，排除白细胞的干扰，从而负向鉴定出靶标细胞(循环肿瘤细胞)。克服了部分循环肿瘤细胞因其表面特征抗原EpCAM或CK低表达而无法实现有效正向鉴定的缺点，使靶标细胞(循环肿瘤细胞)的检出率更高。该方法利用抗原抗体特异性反应，直接在明场显微镜下观察细胞表面免疫微球的结合情况，此方法可避免传统的循环肿瘤细胞荧光检测方法必须依赖荧光显微镜、检测成本高、染色流程长、信号易淬灭等问题。且操作费用低、装置易实现，为普通明场显微镜的实验室开展循环肿瘤细胞检测提供了可能。 | ||
| 搜索关键词： | 循环肿瘤细胞 免疫微球 明场 白细胞 靶标细胞 负向 显微镜 生物工程技术领域 特异性反应 特异性识别 荧光显微镜 表面特征 鉴定技术 抗原抗体 细胞表面 荧光检测 传统的 低表达 检出率 检测 抗原 染色 淬灭 正向 观察 | ||
【主权项】：
1.一种基于免疫微球的循环肿瘤细胞明场负向鉴定方法，其特征在于：所述鉴定方法按以下步骤进行：/na.将Anti-CD45抗体嫁接到规定粒径大小的有机或无机的已活化的微球表面，经过表面化学处理形成免疫微球，待用，用于免疫识别并标记出白细胞；/nb.将经过预固定的癌症病患外周血样通入微流控芯片，完成循环肿瘤细胞的预富集，待用；/nc.将经a步骤得到的免疫微球通入已完成循环肿瘤细胞预富集的微流通道，常温下孵育2小时，使免疫微球与白细胞上的CD45抗原发生特异性结合；并用PBS缓冲液将未与白细胞发生免疫反应的多余微球以及红细胞冲洗出微流控芯片；/nd.最后通过普通明场显微镜进行镜检，根据免疫微球在不同细胞表面的结合情况负向鉴定出循环肿瘤细胞，即与免疫微球发生特异性结合的细胞可判断为白细胞，未与免疫微球结合的细胞可判断为循环肿瘤细胞。/n
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