[发明专利]一种赭曲霉毒素A的比率电化学检测方法

摘要

本发明属于生物传感技术领域，涉及一种检测赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法，并将其用于检测赭曲霉毒素A(OTA)。该比率传感策略通过在金电极上顺序修饰二茂铁标记的互补DNA(Fc‑cDNA)，赭曲霉毒素A适配体(Aptamer)以及一个辅助互补DNA(hDNA)而构建，利用目标诱导的构象变化输出双电流信号IFc和IMB(分别为Fc和MB的氧化电流)，并使用两者的比率信号(IFc/IMB)量化和检测OTA。获得的比率电化学适配体传感器可实现对OTA的高灵敏、高可靠性检测，检测线性范围为10pg/mL‑10ng/mL，检出限为3.3pg/mL。本发明旨在发展一种灵敏度高、选择性好、可靠性高的比率电化学适配体传感器，为测定实际样品中的OTA提供可靠的传感平台。

主权项

1.一种赭曲霉毒素A的比率电化学检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)将金电极AuE依次用不同粒径的三氧化二铝粉末打磨，并依次在乙醇和水中超声以清除表面残留，然后在硫酸溶液中使用循环伏安对电极进行电化学清洗；/n(2)将二茂铁标记的互补DNA即Fc-cDNA修饰到经步骤(1)处理的电极上，利用Au-S键将Fc-cDNA固定在金电极表面；/n(3)将巯基己醇MCH修饰在步骤(2)处理过的电极上，以封闭金的非特异性结合位点；/n(4)将赭曲霉毒素A的适配体Aptamer修饰在步骤(3)处理过的电极上，利用其与cDNA的杂交反应形成双链DNA；/n(5)将辅助互补DNA即hDNA修饰在步骤(4)处理过的电极上，利用杂交反应进一步形成更长的双链DNA；/n(6)将步骤(5)得到的电极浸泡在不同浓度的赭曲霉毒素A的标准溶液中，超纯水冲洗后在室温下自然晾干；/n(7)将步骤(6)得到的电极浸泡在亚甲蓝MB溶液中，超纯水冲洗后在室温下自然晾干，记为MB/OTA/hDNA/Apt/MCH/Fc-cDNA/AuE-1；在三电极体系中，将得到的电极MB/OTA/hDNA/Apt/MCH/Fc-cDNA/AuE-1作为工作电极，Ag/AgCl(饱和KCl)电极为参比电极，铂丝为对电极，以磷酸盐缓冲溶液为电解液，进行电化学交流伏安曲线测量，检测比率信号I