[发明专利]一种提高对映选择性的卤醇脱卤酶突变体及其应用

摘要

一种提高对映选择性的卤醇脱卤酶突变体及其应用，属于酶工程和生物催化技术领域。本发明所述卤醇脱卤酶突变体在SEQ ID NO.1所示序列中第89位精氨酸、第137位缬氨酸、第178位脯氨酸、第179位天冬酰胺、第187位苯丙氨酸进行单点突变或组合突变得到突变体。本发明获得的突变体与野生型卤醇脱卤酶相比，在制备(S)‑邻硝基苯基缩水甘油醚、(R)‑苄基缩水甘油醚和(R)‑苯基缩水甘油醚时的对映体选择率（E值）均有明显提高，最大提高分别为原始酶44.6、2.9、和9.4倍，具有良好的工业应用前景。

主权项

1.一种提高对映选择性的卤醇脱卤酶突变体，其特征在于，所述卤醇脱卤酶突变体在SEQ ID NO. 1所示序列中R位进行单点突变，所述R位为R1位、R2位、R3位、R4位和R5位中的至少一种，所述R1位为第89位精氨酸，R2位为第137位缬氨酸、R3位为第178位脯氨酸、R4位为第179位天冬酰胺、R5位为第187位苯丙氨酸，当R为R1时，将第89位精氨酸分别突变为酪氨酸和赖氨酸，得到突变体R89Y、R89K；当R为R2时，将第137位缬氨酸突变为异亮氨酸，得到突变体V137I；当R为R3时，将第178位脯氨酸突变为丙氨酸，得到突变体P178A；当R为R4时，将第179位天冬酰胺分别突变为谷氨酰胺和亮氨酸，得到突变体N179Q和N179L；当R为R5时，将第187位苯丙氨酸突变为丙氨酸或亮氨酸，得到突变体F187A、F187L；当R为R1和R2或R4时，将第89位精氨酸突变为酪氨酸且第137位缬氨酸突变为异亮氨酸或将第89位精氨酸突变为酪氨酸且将第179位天冬酰胺突变为亮氨酸，分别得到突变体R89Y‑V137I和R89Y‑N179L；当R为R2和R3时，将第137位缬氨酸突变为异亮氨酸且将第178位脯氨酸突变为丙氨酸，得到突变体V137I ‑P178A；当R为R2和R4时，将第137位缬氨酸突变为异亮氨酸且第179位天冬酰胺突变为谷氨酰胺，得到突变体V137I‑N179Q；当R为R4和R5时，将第179位天冬酰胺突变为亮氨酸且将第187位苯丙氨酸突变为亮氨酸，得到突变体N179L‑ F187L；当R为R1、R2和R3时，将第89位精氨酸分别突变为酪氨酸、第137位缬氨酸突变为异亮氨酸且将第178位脯氨酸突变为丙氨酸，得到突变体R89Y‑V137I‑P178A；当R为R1、R2和R4时，将第89位精氨酸分别突变为酪氨酸、第137位缬氨酸突变为异亮氨酸且将第179位天冬酰胺分别突变为亮氨酸，得到突变体R89Y‑V137I‑N179L；当R为R2、R3和R4时，将第137位缬氨酸突变为异亮氨酸、第178位脯氨酸突变为丙氨酸且将第179位天冬酰胺突变为亮氨酸，得到突变体V137I‑P178A‑N179L。