[发明专利]一种适用于贝类软体动物卵的外源物质导入方法

摘要

本发明公开了一种适用于贝类软体动物卵的外源物质导入方法，包括：制备液体凝胶、制备细胞载具、拉针、细胞排布、注射针预处理及显微注射。利用该方法可将外源基因或蛋白导入卵细胞中，提高了外源物质的导入阳性率。

主权项

1.一种适用于贝类软体动物卵的外源物质导入方法，其特征在于，包括下述步骤：1)制备液体凝胶；2)制备细胞载具：取洁净的盖玻片，先以具备与卵径相匹配直径的金属丝沿其宽度方向缠绕5圈，再将缠绕金属丝的盖玻片轻覆于步骤1)中的液体凝胶表面，使液体凝胶浸没盖玻片底面；待液体凝胶凝固后，将缠绕金属丝的盖玻片取下，得到具有多个凹槽的细胞载具，备用；3)拉针：对排布针及注射针进行系统拉针；4)细胞排布：先将步骤3)所得排布针的针尖切除4‑5mm，再以切除针尖后的排布针将卵细胞均匀排布于细胞载具内，并以海水覆盖整个细胞载具；5)注射针预处理：先向注射针内加入外源物质溶液；然后切除注射针针尖20μm，备用；6)显微注射：将细胞载具置于倒置显微镜载物台上，调节注射针与注射针操作臂的夹角，直至注射针与细胞载具所在平面的夹角呈30°，然后以微量显微注射仪对卵细胞进行显微注射。