[发明专利]一种凝血酶抑制活性的测定方法

摘要

本发明公开了一种凝血酶抑制活性的测定方法，取纤维蛋白原溶液和待测试样溶液混合，加入含有磁珠的血凝杯中，作为检测组；使用等体积的缓冲液替代所述检测组中的待测试样溶液，作为空白组；将所述检测组和空白组分别置于37℃放置60～300s，加入步骤S1所述凝血酶溶液，使用全自动凝血分析仪检测血凝杯中溶液的凝固时间，使用t检验对凝固时间进行显著性分析，如果检测组的凝固时间显著大于空白组(P＜0.05)，则认为待测试样具有凝血酶抑制活性。本发明对缓冲液的组分及检测手段进行了优化和改进，有效的避免现了有方法进行检测时出现假阳性结果；并且扩大了可检测样品的范围，为检测提供更大、更准确的样本空间。

主权项

1.一种凝血酶抑制活性的测定方法，其特征在于，包括步骤：S1、分别使用缓冲液溶解纤维蛋白原、凝血酶和待测试样，配置成纤维蛋白原溶液、凝血酶溶液和待测试样溶液；其中所述缓冲液为缓冲液A或缓冲液B；所述缓冲液A：咪唑浓度0.05mol/L、氯化钠浓度0.1～0.15mol/L、氯化钙浓度0.001～0.002mol/L，余量为水，pH为7.35～7.45；所述缓冲液B：Tris浓度0.05mol/L、氯化钠浓度0.1～0.15mol/L、氯化钙浓度为0.001～0.002mol/L，余量为水，pH为7.35～7.45；S2、取步骤S1所述纤维蛋白原溶液和待测试样溶液混合，加入含有磁珠的血凝杯中，作为检测组；使用等体积的步骤S1所述缓冲液替代所述检测组中的待测试样溶液，作为空白组；将所述检测组和空白组分别置于37℃放置60～300s，再加入步骤S1所述凝血酶溶液，以所述纤维蛋白原溶液中纤维蛋白原的总量和所述凝血酶溶液中凝血酶的总量计，每0.5～3mg纤维蛋白原添加6～12U凝血酶；检测血凝杯中溶液的凝固时间，从加入所述凝血酶溶液开始计时，直至血凝杯中磁珠开始转动时停止计时，所记时间为凝固时间；S3、将检测组的凝固时间与步骤S2所述空白组的凝固时间进行比较，使用t检验对凝固时间进行显著性分析；若检测组的凝固时间长于空白组凝固时间、且存在显著性差异，即p＜0.05，则认为待测试样具有凝血酶抑制活性，通过所述检测组凝固时间的长短，判定凝血酶抑制剂的活性强弱，凝固时间越长，则凝血酶抑制活性越强；通过所述待测试样浓度升高时检测组凝固时间的变化来判断凝血酶抑制活性是否依浓度升高而增加，若检测组的凝固时间随待测试样的浓度升高而显著延长，即p＜0.05，则所述待测试样凝血酶抑制活性随其浓度的升高而增大；若检测组的凝固时间随待测试样的浓度升高而无显著延长，即显著性分析结果显示p＞0.05，则试样抑制凝血酶活性的能力不随浓度的升高而增大。