[发明专利]一种分离纯化β-葡萄糖苷酶融合蛋白的方法有效
| 申请号： | 201910702477.7 | 申请日： | 2019-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN110423738B | 公开（公告）日： | 2022-10-28 |
| 发明（设计）人： | 韩娟;王赟;王蕾;李春梅;和兴晨;张红清;旦增曲珍;倪良 | 申请（专利权）人： | 江苏大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12N15/62;C12N15/70 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 212013 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： |
本发明主要涉及一种分离纯化β‑葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，属于分离纯化技术领域；本发明首先诱导表达融合蛋白GLEGB，然后将含有融合蛋白的菌液、表面活性剂和(NH4) |
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| 搜索关键词： | 一种 分离 纯化 葡萄 糖苷酶 融合 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
1.一种分离纯化融合蛋白GLEGB的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：融合蛋白GLEGB的诱导表达：将类弹性蛋白ELP氨基酸序列、GB多肽用连接肽linker连接至葡萄糖苷酶Glu，构建重组质粒pET‑GLEGB，将重组质粒转化到宿主细胞中以表达融合蛋白；ATPF对融合蛋白GLEGB的分离纯化：将含有融合蛋白的菌液、表面活性剂和(NH4)2SO4混合作为下相，上相为PEG2000，进行浮选，分别收集浮选后的上下相溶液，记录体积，并测定浮选后上相和下相中的酶活和蛋白含量；ATPF结合ITC对融合蛋白GLEGB的分离纯化：在收集的上相混合液中添加硫酸铵，水浴加热，离心去上清；之后用Tris‑HCl缓冲液重悬沉淀，并在低温下孵育一定时间，离心去杂质，得到纯化的目标酶溶液。
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