[发明专利]一种基于含磷小分子载体PSS进行目标多肽的液相合成方法

摘要

本发明涉及一种基于含磷小分子载体PSS进行目标多肽的液相合成方法，利用含磷小分子载体PSS替代固相多肽合成中的树脂载体，利于辅助多肽的分离纯化，剪切后不被破坏，容易回收再用。本发明的多肽合成方法兼备了液相和固相合成法的优点，可以更加简便、快捷、节约、高效地大规模合成多肽及其衍生物，而且含磷小分子载体可以回收并直接再利用，可降低原材料浪费、减少废弃物污染、节约成本、利于环保，在有机合成和多肽化学中具有明显的实际应用价值。

主权项

1.一种基于含磷小分子载体PSS进行目标多肽的液相合成方法，其特征在于：采用的含磷小分子载体PSS包括多芳基磷酰氧基苯甲醇或亚磷酸酰氧基苯甲醇类化合物及其衍生物，其分子结构通式为：目标多肽的液相合成步骤如下：步骤1：以含磷小分子载体PSS替代固相多肽合成中的树脂，在脱水偶联剂的作用下与第一个α‑氨基被保护的氨基酸PG‑AA₁‑OH在0～50℃下搅拌反应1～3小时，得到生成物A；所述氨基酸与含磷小分子载体PSS的摩尔比为1～3:1；所述脱水偶联剂为1︰1摩尔比的脱水偶联活化剂和碱性物质；所述第一个α‑氨基被保护的氨基酸PG‑AA₁‑OH中的保护基团PG是：芴甲氧羰基Fmoc‑或叔丁氧羰基Boc‑，保护酪氨酸PG‑AA₁‑OH的C‑端与PSS的辅助基团连接，生成化合物A为PSS‑AA₁‑PG；所述AA是指任意氨基酸；步骤2、分离纯化：向生成物A加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助含磷小分子载体PSS在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物A与其他杂质分离；对分离后的生成物A进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物A；步骤3、脱除N‑端PG：将纯化的生成物A采用脱PG试剂处理，在10～50℃下搅拌反应0.5～2小时得到生成物B为PSS‑AA₁‑NH₂；向生成物B加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助含磷小分子载体PSS在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物B与其他杂质分离；对分离后的生成物B进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物B；步骤4：以纯化的含有含磷小分子载体PSS的生成物B作为原料，再与第二个α‑氨基被保护的氨基酸PG‑AA₂‑OH进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物PSS‑AA₁‑AA₂‑NH₂；以第一次重复后纯化的生成物PSS‑AA₁‑AA₂‑NH₂作为原料，再与第三个α‑氨基被保护的氨基酸PG‑AA₃‑OH进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物PSS‑AA₁‑AA₂‑AA₃‑NH₂；按以上步骤循环重复，以第若干n‑1次重复后纯化的生成物PSS‑AA₁‑AA₂‑AA₃‑XXXXXX‑AA_n‑1‑NH₂作为原料，再与第n个α‑氨基被保护的氨基酸PG‑AA_n‑OH进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到目标序列多肽的前体化合物C，PSS‑AA₁‑AA₂‑AA₃‑XXXXXX‑AA_n‑NH₂，即H‑AAn‑XXXXXX‑AA₃‑AA₂‑AA₁‑PSS；步骤5、侧链脱保护与含磷小分子载体PSS辅助基团的剪除：以三氟乙酸的鸡尾酒溶液为侧链脱保护剂，反应条件为5～30℃下，搅拌1～3小时，脱除侧链上的保护基团tBu、Boc和Pbf，同时剪除含磷小分子载体PSS辅助基团，经分离纯化得到目标序列多肽的三氟乙酸盐，TFA*H‑AAn‑XXXXXX‑AA₃‑AA₂‑AA₁‑OH；所述三氟乙酸的鸡尾酒溶液中的组分比例为：TFA/TIPS/H₂O＝95:2.5:2.5；步骤6、目标序列多肽的分离纯化：将三氟乙酸盐通过旋蒸回收，残留溶液用碳酸氢钠中和，调节pH值至目标序列多肽的等电点；用乙酸乙酯萃取，沉淀析出，经过滤、乙酸乙酯洗涤、干燥得到纯化的目标序列的多肽，H‑AA_n‑XXXXXX‑AA₃‑AA₂‑AA₁‑OH。