[发明专利]一种新型烟粉虱若虫RNA干扰方法构建

摘要

本发明公开了一种烟粉虱若虫体壁渗透法RNA干扰的方法，包括如下步骤：1）棉花苗的培育；2）接虫产卵；3）采用体壁渗透法进行RNA干扰：准备好的dsRNA和外源对照基因dsEGFP，以1：1的体积比将星型聚合物的纳米材料和dsRNA混匀，小心地滴在若虫上，待液滴被虫体吸收后将棉叶插回装有清水的瓶中，放入培养箱中继续饲养，2天后记录死亡数并收集若虫样本。本发明方法利用新型纳米材料的强渗透性，使得dsRNA经体壁快速渗透进烟粉虱体内，显著降低了死亡率，提高了干扰效率，具有很高的时效性和良好的重复性。此外，本发明方法所用到的dsRNA量非常少，约0.3μl/头，在保证干扰效率的同时，大大降低了实验成本，具有很好的应用前景。

主权项

1.一种烟粉虱若虫体壁渗透法RNA干扰的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1）棉花苗的培育：将浸种过的棉籽播种到苗盆里，待棉苗长出1片直径1.5-2.5cm真叶时，将棉苗连根拔起待用；/n2）接虫产卵：将棉苗放于2个接壤在一起的瓶中，瓶盖上设有透气孔，瓶中放入若干对烟粉虱成虫，产卵后将成虫吹走，将接完卵的棉苗放入培养箱中，待卵孵化并发育到3-4龄若虫后，记录若虫个数；/n3）采用体壁渗透法进行RNA干扰：准备好1μg/μl的dsRNA和外源对照基因dsEGFP，以1：1的体积比将星型聚合物的纳米材料和dsRNA混匀，将附有3-4龄若虫的棉叶取出，用移液器吸取混合液，小心地滴在若虫上，液滴以刚好包裹住虫体为宜，待液滴被虫体吸收后将棉叶插回装有清水的瓶中，放入培养箱中继续饲养；，2天后记录死亡数并收集若虫样本；/n其中，所述星型聚合物的纳米材料中星型聚合物P1或P2在水溶液中可自组装形成纳米微球，且星型聚合物P1的化学结构式为：/n