[发明专利]合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌及构建方法及应用在审
| 申请号： | 201910636614.1 | 申请日： | 2019-07-15 |
| 公开（公告）号： | CN110438145A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 卢文玉;徐硕;张传波;李曼;武玉芬 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/77 | 分类号： | C12N15/77;C12N1/21;C12P7/04;C12R1/15 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 曹玉平 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌及构建方法及应用，其构建方法为：将酿酒酵母来源的突变香叶基焦磷酸合成酶基因ERG20F96W‑N127W和截短C端53个氨基酸残基的缬草来源的香叶醇合成酶基因tVoGES通过融合PCR的方法连接，同源区加入核糖体结合位点序列，插入谷氨酸棒状杆菌表达质粒pEC‑XK99E的SacI和XbaI酶切位点得到质粒1；将质粒1转化进入谷氨酸棒状杆菌，得到合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌1；本发明为香叶醇的合成提供更多的前体，发酵时间短，42‑48小时，经气质检测，未检测出相应的副产物。 | ||
| 搜索关键词： | 谷氨酸棒状杆菌 香叶醇 合成 构建 合成酶 质粒 核糖体结合位点序列 氨基酸残基 表达质粒 基焦磷酸 酿酒酵母 基因 副产物 同源区 检测 截短 前体 位点 香叶 缬草 突变 发酵 应用 融合 转化 | ||
【主权项】：
1.合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：将酿酒酵母来源的突变香叶基焦磷酸合成酶基因ERG20F96W‑N127W和截短C端53个氨基酸残基的缬草来源的香叶醇合成酶基因tVoGES通过融合PCR的方法连接，同源区加入核糖体结合位点序列，插入谷氨酸棒状杆菌表达质粒pEC‑XK99E的SacI和XbaI酶切位点得到质粒1；将质粒1转化进入谷氨酸棒状杆菌，得到合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌1；所述酿酒酵母来源的突变香叶基焦磷酸合成酶基因ERG20F96W‑N127W的核苷酸序列用SEQ ID NO.1所示；所述截短C端53个氨基酸残基的缬草来源的香叶醇合成酶基因tVoGES的核苷酸序列用SEQ ID NO.2所示；ERG20F96W‑N127W和tVoGES间的核糖体结合位点的核苷酸序列用SEQ ID NO.3所示。
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