[发明专利]合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌及构建方法及应用在审
| 申请号： | 201910636614.1 | 申请日： | 2019-07-15 |
| 公开（公告）号： | CN110438145A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 卢文玉;徐硕;张传波;李曼;武玉芬 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/77 | 分类号： | C12N15/77;C12N1/21;C12P7/04;C12R1/15 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 曹玉平 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 谷氨酸棒状杆菌 香叶醇 合成 构建 合成酶 质粒 核糖体结合位点序列 氨基酸残基 表达质粒 基焦磷酸 酿酒酵母 基因 副产物 同源区 检测 截短 前体 位点 香叶 缬草 突变 发酵 应用 融合 转化 | ||
1.合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：
将酿酒酵母来源的突变香叶基焦磷酸合成酶基因ERG20F96W-N127W和截短C端53个氨基酸残基的缬草来源的香叶醇合成酶基因tVoGES通过融合PCR的方法连接，同源区加入核糖体结合位点序列，插入谷氨酸棒状杆菌表达质粒pEC-XK99E的SacI和XbaI酶切位点得到质粒1；将质粒1转化进入谷氨酸棒状杆菌，得到合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌1；
所述酿酒酵母来源的突变香叶基焦磷酸合成酶基因ERG20F96W-N127W的核苷酸序列用SEQID NO.1所示；
所述截短C端53个氨基酸残基的缬草来源的香叶醇合成酶基因tVoGES的核苷酸序列用SEQ ID NO.2所示；
ERG20F96W-N127W和tVoGES间的核糖体结合位点的核苷酸序列用SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是还包括如下步骤：
将脱氧木酮糖-5-磷酸合酶基因dxs和异戊烯焦磷酸异构酶基因idi通过融合PCR的方法连接，同源区加入第二种核糖体结合位点序列，插入到质粒pXMJ19的XbaI和SmaI酶切位点，得到质粒2；将质粒2转化到所述合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌1中，得到合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌2。
所述脱氧木酮糖-5-磷酸合酶基因dxs的核苷酸序列用SEQ ID NO.4所示；
所述异戊烯焦磷酸异构酶基因idi的核苷酸序列用SEQ ID NO.5所示；
dxs和idi间的第二种核糖体结合位点的核苷酸序列用SEQ ID NO.6所示。
3.权利要求1合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌的构建方法构建的合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌1。
4.权利要求2合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌的构建方法构建的合成香叶醇的谷氨酸棒状杆菌2。
5.权利要求3的谷氨酸棒状杆菌1发酵生产香叶醇的用途。
6.权利要求4的谷氨酸棒状杆菌2发酵生产香叶醇的用途。
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