[发明专利]一种组织工程用胰岛细胞微囊及其制备方法

摘要

本发明属医学生物工程领域，涉及一种组织工程用胰岛细胞微囊及其制备方法。本发明采用海藻酸钠‑活性氨基组分‑聚乙二醇的结构，其内层由精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸肽修饰的海藻酸钠对细胞进行包裹，然后用超支化聚乙烯亚胺偶联的聚赖氨酸作为稳定剂，其中超支化聚乙烯亚胺对聚赖氨酸层进行了交联加固，提高了微囊的机械性能。微囊的最外层是由单边固定在活性氨基组分的聚乙二醇链段组成，由于其具有滑动性能，对蛋白质、细胞的粘附起到抑制作用。由于聚乙二醇在人体中是趋于“隐形”的材料，故而本发明所述微囊在一定程度上可以抑制被纤维化，从而延长活性细胞的存活时间。可在一定程度上改善1型糖尿病病人血糖水平。

主权项

1.一种组织工程用胰岛细胞微囊，其特征在于，该细胞微囊按下列步骤进行：（1）将胰岛细胞与浓度为15‑25g/L精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸肽修饰的海藻酸钠溶液混合，制成悬浮液，使每毫升悬浮液中含1‑6×10⁶个细胞；（2）利用喷雾装置将步骤（1）获得的悬浮液以150‑1000μm直径的微滴状态分散于一种浓度为80‑120mmol/L的氯化钙或乳酸钙溶液中，两种液体的比例为保证每升混合液含0.5‑1×10⁸个细胞，放置5‑10分钟，待沉淀完全除去上清液，获得胰岛细胞的海藻酸钙沉淀；（3）将步骤（2）获得的沉淀物加入到一种浓度为0.3‑0.7g/L的活性氨基溶液中，二者的比例保证每升液体含0.5‑1×10⁸个细胞，混合均匀，放置5‑20分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得沉淀物；（4）将步骤（3）获得的沉淀物加入到浓度为100‑300g/L的活性聚乙二醇溶液中，二者的比例为保证每升液体含0.5‑1×10⁸个细胞，混合均匀，放置3‑15分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得沉淀物；（5）将步骤（4）获得的沉淀物加入到一种浓度为45‑75mmol/L的柠檬酸钠溶液中，二者的比例为保证每升液体含0.5‑1×10⁸个细胞，混合均匀，放置5‑20分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得胰岛细胞微囊沉淀物；（6）将步骤（5）获得的沉淀物加入到一种浓度为9g/L的氯化钠溶液中清洗，最后将沉淀物转移入细胞培养液中培养待用。