[发明专利]一种组织工程用胰岛细胞微囊及其制备方法

权利要求书

1.一种组织工程用胰岛细胞微囊的制备方法，其特征在于，该细胞微囊按下列步骤进行：

（1）将胰岛细胞与浓度为15-25g/L精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽修饰的海藻酸钠溶液混合，制成悬浮液，使每毫升悬浮液中含1-6×10⁶个细胞；

（2）利用喷雾装置将步骤（1）获得的悬浮液以150-1000μm直径的微滴状态分散于一种浓度为80-120mmol/L的氯化钙或乳酸钙溶液中，两种液体的比例为保证每升混合液含0.5-1×10⁸个细胞，放置5-10分钟，待沉淀完全除去上清液，获得胰岛细胞的海藻酸钙沉淀；

（3）将步骤（2）获得的沉淀物加入到一种浓度为0.3-0.7g/L的活性氨基溶液中，二者的比例保证每升液体含0.5-1×10⁸个细胞，混合均匀，放置5-20分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得沉淀物；

（4）将步骤（3）获得的沉淀物加入到浓度为100-300g/L的活性聚乙二醇溶液中，二者的比例为保证每升液体含0.5-1×10⁸个细胞，混合均匀，放置3-15分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得沉淀物；

（5）将步骤（4）获得的沉淀物加入到一种浓度为45-75mmol/L的柠檬酸钠溶液中，二者的比例为保证每升液体含0.5-1×10⁸个细胞，混合均匀，放置5-20分钟，待沉淀完全后除去上清液，获得胰岛细胞微囊沉淀物；

（6）将步骤（5）获得的沉淀物加入到一种浓度为9g/L的氯化钠溶液中清洗，最后将沉淀物转移入细胞培养液中培养待用；

步骤（3）中所述活性氨基溶液为含有超支化聚乙烯亚胺偶联的聚赖氨酸溶液，其中聚赖氨酸:超支化聚乙烯亚胺的质量比为90:10；

步骤（4）中所述活性聚乙二醇为聚乙二醇琥珀酰亚胺甲酸酯、聚乙二醇琥珀酰亚胺乙酸酯、聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酯、聚乙二醇琥珀酰亚胺丁酸酯、聚乙二醇琥珀酰亚胺戊酸酯、聚乙二醇琥珀酰亚胺己酸酯。

2.根据权利要求1所述的组织工程用胰岛细胞微囊的制备方法，其特征在于，所述胰岛细胞具有85%以上的纯度。

3.根据权利要求1所述的组织工程用胰岛细胞微囊的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽修饰的海藻酸钠中，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽与海藻酸钠的摩尔比为0.10-0.20:100。

4.根据权利要求1所述的组织工程用胰岛细胞微囊的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中将步骤（1）获得的细胞悬液以200-600μm直径的胶珠分散。

5.按照权利要求1-4中任一所述制备方法获得的组织工程胰岛细胞微囊。