[发明专利]一种高效提取橄榄叶片核酸物质的方法

摘要

本发明公开了一种高效提取橄榄叶片中高质量核酸物质的方法，其操作步骤主要包括取样、研磨、裂解、除杂、沉淀、纯化和溶解等。本发明针对橄榄富含多酚、多糖、蛋白质等杂质的特点，其在传统CTAB法的基础上，针对橄榄叶片特征进行深度优化，对样品用量、试剂种类、试剂浓度、反应时间、反应体积、操作步骤等进行系统改良，开发适用于橄榄嫩叶、成熟叶或老叶核酸物质高效率和高质量提取的方法。本方法可根据实际需求，选择提取橄榄叶片基因组DNA或总RNA，适用性广，实用性强，具有很好的应用价值。

主权项

1.一种高效提取橄榄叶片核酸物质的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）取样：采集无病虫害橄榄叶片，用清水洗净，用滤纸吸干叶表水分，短暂摊凉，迅速用剪刀去除叶脉；（2）研磨：称取上述样品0.5‑0.6g，置于研钵中，加入10mg的PVP，液氮下快速研磨成匀浆，转移至15mL离心管中；（3）裂解：加入10mL 65℃预热的质量体积比为3%的CTAB裂解液，加入100μLβ‑巯基乙醇，置于65℃条件下温浴30min，期间每隔10min颠倒混匀1次；（4）除杂：裂解结束后，冷却至室温，在温度为4℃、转速为12000rcf下离心2min；取上清液4mL，加入4mL体积比为25:24:1的苯酚氯仿异戊醇混合液，轻轻混匀，静置1min，再离心10min；（5）沉淀；重复步骤（4）2‑3次；取1mL上清液，加入200μL浓度为3mol/L的醋酸钠，再加入800μL无水乙醇，轻轻混匀，静置至有白色沉淀析出；（6）纯化；将步骤（5）的白色沉淀转入核酸纯化柱，在温度为4℃、转速为4000rcf下离心2min；再加入4℃预冷过的75%乙醇1mL，然后离心2min；（7）溶解；重复步骤（6）2‑3次；取出纯化柱置于室温中干燥2min，加50μL高压过的ddH₂O，静置2min，在温度为4℃、转速为12000rcf下离心2min，收集橄榄核酸提取产物，加入1μL核酸水解酶后即得到橄榄叶片核酸物质。