[发明专利]一种主动脉夹层特异性诱导多能干细胞及疾病模型应用

摘要

本发明公开了一种主动脉夹层特异性诱导多能干细胞及疾病模型应用，提供一种稳定传代并带有人源主动脉夹层特异性遗传信息的多能干细胞系，从而可获得体外细胞模型模拟患者的部分病理状态并研究疾病的发生发展过程的细胞及分子机制，本发明公开一种特异性诱导多能干细胞的制备方法，其方法利用episomal质粒电转方法将转录因子直接转入细胞，操作简便，节省时间，为体外疾病细胞模型的建立创造了良好的条件，进一步提供了由动脉夹层特异性诱导多能干细胞系定向分化为具有AD病人特异性遗传信息的平滑肌细胞，以建立一个稳定的体外平滑肌细胞AD疾病模型，以及在制备人主动脉夹层细胞模型中的应用，用以应用在AD相关病理机制研究以及个体化药物筛选。

主权项

1.一种主动脉夹层特异性诱导多能干细胞的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、采集人源性胸主动脉夹层手术丢弃的主动脉组织；步骤二、将步骤一中的主动脉组织剪碎贴壁培养获得原代细胞；步骤三、将含有OCT4、KLF4、SOX2、L‑MYC、Lin28、shp53基因的4个episomal质粒经nucleofector电转入原代细胞，培养3‑7天后转入预先铺有Matrigel的培养皿培养，加入重编程培养液隔天换液培养，在克隆长出后用TeSR E8每天换液培养，挑取克隆扩增，建立动脉夹层iPSC细胞系。