[发明专利]一种用斑马鱼缺血性脑卒中模型评价脑卒中治疗剂的方法

摘要

本发明提供了斑马鱼缺血性脑卒中模型的建立方法，以及用该模型筛选或评价脑卒中治疗剂的用途与评价方法。本发明提供的斑马鱼缺血性脑卒中模型，选择特定的诱导剂和发育阶段的斑马鱼造模，造模可行，能准确反映药物在体内的真实情况，可实现在体内高通量筛选或评价药物对缺血性脑卒中的治疗功效，具有可靠、快速、高效、低廉、高性价比等优点，意义重大。

主权项

1.一种斑马鱼缺血性脑卒中模型的建立方法，包括如下步骤：(1)斑马鱼最佳发育阶段的确定取基因突变型Albino品系斑马鱼亲本交配、孵化，选择不同发育阶段的斑马鱼分别移入微孔板；根据不同的发育阶段将对应的微孔板设置如下实验组：诱导剂处理组，该组中对斑马鱼水溶给药单浓度的诱导剂；正常对照组，该组中对斑马鱼不进行任何处理；然后，各实验组均加入相同体积的养鱼用水，在相同温度下恒温培养；当诱导剂处理斑马鱼至实验终点后，将实验组的斑马鱼置于心跳血流分析系统，分析斑马鱼脑部供血量和血流速度，判断并确定斑马鱼的最佳发育阶段；所述不同发育阶段的斑马鱼为2～4dpf的斑马鱼；所述最佳发育阶段的斑马鱼为2dpf的斑马鱼；(2)诱导剂最佳给药浓度的确定将步骤(1)确定的2dpf斑马鱼移入微孔板中，设置如下实验组：正常对照组和不同给药浓度的诱导剂处理组；正常对照组中对斑马鱼不进行任何处理，诱导剂处理组中对斑马鱼水溶给药不同浓度的诱导剂；然后，各实验组均加入相同体积的养殖用水，在相同温度下恒温培养；当诱导剂处理斑马鱼至实验终点后，各实验组中加入邻联茴香胺染色液，对染色处理后的斑马鱼脑部位置拍照并保存，统计脑卒中发生率，判断并确定诱导剂的最佳给药浓度；所述诱导剂的给药浓度为0.5～10μg/mL，所述诱导剂的最佳给药浓度为2.5μg/mL；所述步骤(1)、步骤(2)中的诱导剂，为普纳替尼。