[发明专利]一种CAR-T细胞的制备方法在审
| 申请号： | 201910303075.X | 申请日： | 2019-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN109868260A | 公开（公告）日： | 2019-06-11 |
| 发明（设计）人： | 李军辉 | 申请（专利权）人： | 上海汉尼生物细胞技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海湾谷知识产权代理事务所(普通合伙) 31289 | 代理人： | 李晓星 |
| 地址： | 201108 上海市闵*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种CAR‑T细胞的制备方法，其包括：采集供者的外周血单个核细胞；分选出CD3+T淋巴细胞，并进行激活培养；将带有目的基因的慢病毒载体感染激活的T淋巴细胞，并在转染时添加了一定比例的DMSO；转染后换液，并继续对转染后的T细胞进行扩增培养，获得CAR‑T细胞终产品。本发明在病毒载体转染步骤中，添加适量的DMSO，显著地降低了病毒转染所需的MOI，从而降低病毒的用量，提高了CAR‑T细胞的转染效率，大大降低了制备成本。 | ||
| 搜索关键词： | 转染 制备 外周血单个核细胞 激活 慢病毒载体 病毒载体 病毒转染 扩增培养 目的基因 转染效率 对转 换液 病毒 采集 细胞 感染 | ||
【主权项】：
1.一种CAR‑T细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)采集供者的外周血单个核细胞；2)从步骤1)采集的外周血单个核细胞中分选出CD3+T淋巴细胞；3)对分选得到的CD3+T淋巴细胞进行激活培养，培养温度为37℃，CO2浓度为5％；4)将带有目的基因的慢病毒载体感染经过步骤3)激活培养后的T淋巴细胞，转染时的培养温度为37℃，CO2浓度为5％，且转染时在培养基中按照每100ml培养基添加0.1‑5ml的比例添加DMSO；5)对经步骤4)转染后的T淋巴细胞进行扩增培养，培养温度为37℃，CO2浓度为5％，获得CAR‑T细胞终产品。
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