[发明专利]基于G-四联体DNAzyme信号放大策略的适配体传感器的黄体酮检测方法

摘要

本发明公开了一种基于G‑四联体DNAzyme信号放大策略的适配体传感器的黄体酮检测方法，与传统的黄体酮检测方法相比，其避免了贵重仪器的分析方法的建立；使用核酸适配体为识别元件提高了目标物检测的选择性和稳定性。将信号放大策略与电分析方法相结合，构建以黄体酮为检测对象的电化学传感新方法和新技术，提高分析的灵敏度。本发明检测黄体酮的方法更简便，更灵敏，选择性且成本效益更高，在痕量生物小分子分析中有着重要的实际意义和发展前景。

主权项

1.一种基于G‑四联体DNAzyme信号放大策略的适配体传感器的黄体酮检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：黄体酮适配体、cDNA、H1和H2首次开盖使用前先离心，分别将其溶于二次水中配成100μM的母液，再用DNA稀释液分别稀释，4℃保存待用；步骤二：玻碳电极的打磨及清洗：用三种不同粒径的Al₂O₃抛光粉依次在麂皮上将玻碳电极打磨抛光；之后用丙酮、无水乙醇、二次水依次超声清洗，自然晾干待用；步骤三：通过电聚沉金的方法在步骤二处理好的玻碳电极表面沉积金纳米颗粒；步骤四：将步骤一获得的适配体溶液滴加在步骤三玻碳电极表面上进行孵育，二次水轻轻冲洗，自然晾干；然后加入巯基己醇孵育，用于封闭电极表面剩余的活性位点，二次水轻轻冲洗，自然晾干；步骤五：将步骤一获得的cDNA溶液滴加在步骤四电极表面上进行孵育，水洗、晾干；继续加上不同浓度的黄体酮目标溶液进行孵育，重复水洗、晾干操作；步骤六：在步骤五电极表面上同时加入步骤一获得的H1和H2溶液混合孵育，水洗、晾干；继续加Hemin溶液孵育，重复水洗晾干操作；步骤七：电化学检测：步骤六获得的修饰电极作为工作电极，参比电极是Ag/AgCl电极，对电极为铂电极，将三电极与电化学工作站相连接，通过示差脉冲伏安法对含有H₂O₂,OPD的PBS混合液进行扫描，记录电化学响应信号。