[发明专利]防止茸毛堵塞离心柱的山银花干燥叶片DNA提取方法有效
| 申请号： | 201910257333.5 | 申请日： | 2019-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN109971751B | 公开（公告）日： | 2022-11-25 |
| 发明（设计）人： | 韦筱媚;胡营;许雄彪;韦坤华;梁莹;郭晓云 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区药用植物园 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理有限公司 11369 | 代理人： | 靳浩 |
| 地址： | 530023 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种防止茸毛堵塞离心柱的山银花干燥叶片DNA提取方法，包括：步骤一、向干燥的山银花叶片加入PVP和维生素C研磨成细粉；步骤二、向细粉加入CTAB提取缓冲液和β‑巯基乙醇的混合液混合，然后水浴加热，得悬浮液；步骤三、冷却至室温，加入氯仿和异戊醇混合溶剂混合均匀，离心，取上清液；步骤四、向上清液加入异丙醇，混合均匀得待提液；步骤五、将待提液转移至DNA提取试剂盒的离心柱中，离心，弃废液；步骤六、向离心柱加入乙醇，离心，弃废液，将离心柱晾干至无乙醇；步骤七、向离心柱加入TE缓冲液，离心，收集收集管中的溶液，即为山银花叶片DNA溶液。本发明具有防止山银花叶处茸毛堵塞离心柱的有益效果。 | ||
| 搜索关键词： | 防止 茸毛 堵塞 离心 山银花 干燥 叶片 dna 提取 方法 | ||
【主权项】：
1.防止茸毛堵塞离心柱的山银花干燥叶片DNA提取方法，其特征在于，包括：步骤一、向干燥的山银花叶片加入PVP和维生素C，研磨成细粉；步骤二、向细粉中加入CTAB提取缓冲液和β‑巯基乙醇的混合液，混合至细粉完全悬浮，然后于65℃水浴加热30～45min，在水浴加热期间摇匀，得悬浮液；其中，CTAB提取缓冲液与山银花叶片的体积质量比为700μL:0.02～0.04g，混合液为体积分数为2％的β‑巯基乙醇的CTAB提取缓冲液，悬浮液与PVP的体积质量比为100mL:1g，悬浮液与维生素C的体积质量比为100mL:1g；步骤三、悬浮液冷却至室温，加入氯仿和异戊醇混合溶剂混合均匀，离心，取上清液；步骤四、向步骤三中的上清液加入异丙醇，混合均匀得待提液；步骤五、将步骤四中的待提液转移至DNA提取试剂盒的离心柱中，离心，弃掉收集管中的废液；步骤六、向离心柱内的物质中加入乙醇，离心，弃掉收集管中的废液，将离心柱晾干至无乙醇；步骤七、向离心柱内的物质中加入TE缓冲液，离心，收集收集管中的溶液，即为山银花叶片DNA溶液。
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