[发明专利]一种人肺泡上皮细胞分离与培养方法

摘要

本发明提供了一种人肺泡上皮细胞分离与培养方法，采集的组织在活化基底的包围下可以有效地进行贴壁生长，血清成分可抑制肺泡上皮细胞的分裂和分化，从而大大提高了细胞活力；组织碎片在特定的气体环境下震荡培养，可以有效避免采集的组织样本由于缺血而引起损伤，以利于后续的培养操作；传代培养基中添加的尿囊素、肌酸和积雪草苷可以有效提高细胞活力和分裂能力，从而促进细胞生长和增殖；将3T3细胞作为滋养层，可以为原代肺泡上皮细胞提供良好的生长基底，有效促进肺泡上皮细胞的生长分裂，从而大大提高培养效果。通过上述方法，可以显著提高肺泡上皮细胞的活性和增值速率，从而为相关研究项目提供优质的实验材料。

主权项

1.一种人肺泡上皮细胞分离与培养方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：在无菌条件下采集肺叶样本，将气管切成片状组织，得到肺泡上皮组织的组织碎片；S2：配置用于细胞贴壁生长的活化基底，涂布在培养皿上并进行固化；S3：在固化的所述活化基底上设置接种位置，并将所述组织碎片接种到所述接种位置上，使所述组织碎块贴附在培养皿底壁；S4：向接种后的组织碎片中添加活化培养液，置于混合氧气内进行活化培养；S5：将经过活化培养的组织碎片转移到新的涂布有活化基底的培养皿中，添加原代培养液，在CO₂培养箱中进行原代培养，培养8～10d后将组织碎片转移至新的涂布有活化基底的培养皿中，重复原代培养过程若干次，得到原代细胞；S6：将所述原代细胞以每瓶10⁴个细胞的浓度进行接种，采用经过照射的3T3细胞作滋养层，加入传代培养液进行悬浮培养，得到传代细胞。