[发明专利]一种仿生糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架及其制备方法

摘要

本发明涉及一种仿生糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架及其制备方法。本发明以糖基化矿化胶原、糖基化壳聚糖和PLGA为原料制备多孔复合骨组织工程支架材料，通过调整原料的组成比例弥补了单一材料成型性差、力学强度低和细胞吸附性弱的缺点。PLGA具有良好的生物相容性、无毒和良好的成型性能，通过热致分相法将糖基化矿化胶原、糖基化壳聚糖与PLGA结合制备的三维孔洞网络结构，具有与天然骨极其相似的纳米结构，有利于细胞在支架材料表面的粘附、增殖与分化，一定的粗糙度和孔隙率也有利于新生骨组织长入植入体表面，并促进植入体/宿主组织界面处的骨整合过程。

主权项

1.一种仿生糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架的制备方法，其特征在于，步骤如下：(1)糖基化壳聚糖的制备：将透明质酸、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐、N‑羟基琥珀酰亚胺加入反应体系中，36～38℃搅拌反应0.5～2h后加入壳聚糖，继续搅拌16～24h，离心获得上清液，调节pH至7.1，继续搅拌3～5h后调节pH至7.5，离心收集沉淀，将沉淀洗涤后，干燥获得糖基化壳聚糖；所述反应体系为吗啉乙磺酸缓冲液，浓度为0.01～0.05M；所述透明质酸在反应体系中的浓度为1～5mg/mL，所述1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐在反应体系中的浓度为4～8mg/mL，所述N‑羟基琥珀酰亚胺在反应体系中的浓度为6～7mg/mL，所述壳聚糖在反应体系中的浓度为4～8mg/mL；(2)糖基化矿化胶原的制备：透明质酸与胶原在氰基硼氢化钠的作用下发生交联反应，35～40℃避光条件下磁力搅拌24h～36h，将交联溶液用醋酸稀释6～8倍，超滤除去未交联分子，冷冻干燥获得糖基化胶原；将糖基化胶原溶解于盐酸中得糖基化胶原溶液，向糖基化胶原溶液中缓慢滴加含有PO₄^3‑的水溶液，然后逐滴加入含有Ca²⁺的水溶液，调节pH至7.0，室温下静置24～48h，收集沉淀，沉淀洗涤后，干燥获得糖基化矿化胶原；所述交联反应的反应体系为六氟异丙醇和碳酸氢钠水溶液按体积比3:(1～2)的混合溶液，碳酸氢钠水溶液的摩尔浓度为0.1～0.2M；所述透明质酸在反应体系中的浓度为4～6mg/mL，所述胶原在反应体系中的浓度为14～18mg/mL，所述氰基硼氢化钠在反应体系中的浓度为4～6mg/mL；所述糖基化胶原溶液的浓度为0.5～0.8g/L；所述含有PO₄^3‑的水溶液为NaH₂PO₄溶液，加入PO₄^3‑的量为0.010～0.060mol/克糖基化胶原；含有Ca²⁺的水溶液为CaCl₂溶液，加入Ca²⁺的量与PO₄^3‑的量的摩尔比为(1.6～1.8)：1；(3)糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架的制备：以溶剂溶解PLGA，得质量浓度为8％～10％的PLGA溶液，将步骤(1)和步骤(2)制得的糖基化壳聚糖和糖基化矿化胶原加入到PLGA溶液中，分散均匀后，将所得悬浊液注入到直径为1cm的圆柱形聚四氟乙烯模具中降温、成型、干燥后获得仿生糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架。