[发明专利]一种仿生糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架及其制备方法

权利要求书

1.一种仿生糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架，其特征在于，是通过热致分相法将糖基化矿化胶原、糖基化壳聚糖与PLGA结合制备的三维孔洞网络结构；

所述的仿生糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架是按照如下方法制备得到的：

（1）糖基化壳聚糖的制备：将透明质酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺加入反应体系中，36～38℃搅拌反应0.5～2h后加入壳聚糖，继续搅拌16～24h，离心获得上清液，调节pH至7.1，继续搅拌3～5h后调节pH至7.5，离心收集沉淀，将沉淀洗涤后，干燥获得糖基化壳聚糖；

所述反应体系为吗啉乙磺酸缓冲液，浓度为0.01～0.05M；所述透明质酸在反应体系中的浓度为1～5 mg/mL，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐在反应体系中的浓度为4～8 mg/mL，所述N-羟基琥珀酰亚胺在反应体系中的浓度为6～7 mg/mL，所述壳聚糖在反应体系中的浓度为4～8 mg/mL；

（2）糖基化矿化胶原的制备：透明质酸与胶原在氰基硼氢化钠的作用下发生交联反应，35～40℃避光条件下磁力搅拌24h～36h，将交联溶液用醋酸稀释6～8倍，超滤除去未交联分子，冷冻干燥获得糖基化胶原；将糖基化胶原溶解于盐酸中得糖基化胶原溶液，向糖基化胶原溶液中缓慢滴加含有PO₄^3-的水溶液，然后逐滴加入含有Ca²⁺的水溶液，调节pH至7.0，室温下静置24～48h，收集沉淀，沉淀洗涤后，干燥获得糖基化矿化胶原；

所述交联反应的反应体系为六氟异丙醇和碳酸氢钠水溶液按体积比3:（1～2）的混合溶液，碳酸氢钠水溶液的摩尔浓度为0.1～0.2 M；所述透明质酸在反应体系中的浓度为4～6 mg/mL，所述胶原在反应体系中的浓度为14～18mg/mL，所述氰基硼氢化钠在反应体系中的浓度为4～6 mg/mL；

所述糖基化胶原溶液的浓度为 0.5～0.8 g/L；所述含有PO₄^3-的水溶液为NaH₂PO₄溶液，加入PO₄^3-的量为0.010～0.060 mol/克糖基化胶原；含有Ca²⁺的水溶液为CaCl₂溶液，加入Ca²⁺的量与PO₄^3-的量的摩尔比为（1.6～1.8）：1；

（3）糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架的制备：以溶剂溶解PLGA，得质量浓度为8%～10%的PLGA溶液，将步骤（1）和步骤（2）制得的糖基化壳聚糖和糖基化矿化胶原加入到PLGA溶液中，所述糖基化矿化胶原、糖基化壳聚糖和PLGA的质量比为5:1:4；分散均匀后，将所得悬浊液注入到直径为1cm的圆柱形聚四氟乙烯模具中降温、成型、干燥后获得仿生糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架。

2.如权利要求1所述的复合骨组织工程支架，其特征在于，步骤（1）中，所述透明质酸的重均分子量为700～5000 Da；所述壳聚糖的重均分子量为50 KDa，脱乙酰度为90%。

3.如权利要求1所述的复合骨组织工程支架，其特征在于，步骤（1）中，所述吗啉乙磺酸缓冲液的浓度为0.05M；所述透明质酸在反应体系中的浓度为3 mg/mL，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐在反应体系中的浓度为6 mg/mL，所述N-羟基琥珀酰亚胺在反应体系中的浓度为6.5 mg/mL，所述壳聚糖在反应体系中的浓度为6 mg/mL。

4.如权利要求1所述的复合骨组织工程支架，其特征在于，步骤（1）满足以下条件中的一项或多项：

i. 所述搅拌反应的条件为：37℃搅拌反应0.5h后加入壳聚糖，继续搅拌20h；

ii. 所述离心的条件为：8000 rpm离心10 min；

iii. 所述调节pH采用浓度为0.10M的氢氧化钠溶液；

iv. 所述沉淀洗涤的过程为去离子水反复洗涤沉淀3次，每次洗涤后8000 rpm离心，离心时间10 min/次。