[发明专利]一种血浆中沃诺拉赞的定量检测方法

摘要

本发明属于沃诺拉赞检测技术领域，公开了一种血浆中沃诺拉赞的定量检测方法，包括以下步骤：(1)标准工作溶液的配制：沃诺拉赞工作溶液及内标工作溶液均在‑20℃下保存，备用；(2)校正标样的配制：分别加入空白血浆样品，混匀，配制成多个校正标样；(3)样品处理：等体积地取多个校正标样及待测血浆样品，分别加入步骤(1)中的内标工作溶液，分别加入乙腈，混匀，离心，取上清液，保存待用；(4)LC‑MS/MS分析测定；(5)标准曲线制作(6)定量分析：按照步骤(4)，等量取待测血浆样品对应的上清液，进行LC‑MS/MS分析测定。本发明的定量检测方法具备操作简单、分离效果好、定性准确、样品分析时间短及检测灵敏度高的特点。

主权项

1.一种血浆中沃诺拉赞的定量检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)标准工作溶液的配制：称取沃诺拉赞，加入甲醇配制成浓度为0.1～1mg·mL^‑1的沃诺拉赞储备液，将所述沃诺拉赞储备液用体积比为1:1的乙腈水溶液稀释成浓度为2～1000ng·mL^‑1的沃诺拉赞工作溶液；称取沃诺拉赞的内标物，加入体积比为1:1的甲醇水溶液配制成浓度为1～10mg·mL^‑1的内标储备液，用体积比为1:1的乙腈水溶液稀释成1～10ng·mL^‑1的内标工作溶液；所述沃诺拉赞工作溶液及所述内标工作溶液均在‑20℃下保存，备用；(2)校正标样的配制：取多个不同浓度的沃诺拉赞工作溶液，分别加入空白血浆样品，混匀，配制成多个校正标样，校正标样的浓度为0.1～50ng·mL^‑1；(3)样品处理：等体积地取多个校正标样及待测血浆样品，分别加入步骤(1)中的内标工作溶液，分别加入乙腈，混匀，离心，取上清液，保存待用；(4)LC‑MS/MS分析测定：等量取步骤(3)的多个校正标样对应的上清液，分别加入含0.2％甲酸的10mM乙酸铵水溶液，混匀，进行LC‑MS/MS分析测定，得多个校正标样的沃诺拉赞和内标物的色谱图；(5)标准曲线制作：以沃诺拉赞和内标物的色谱峰面积比为纵坐标，以沃诺拉赞的血药浓度与内标物的血药浓度的比值为横坐标制作标准曲线，用加权最小二乘法进行线性回归，得回归方程Y＝a+bX；(6)定量分析：按照步骤(4)，等量取待测血浆样品对应的上清液，加入含0.2％甲酸的10mM乙酸铵水溶液，混匀，进行LC‑MS/MS分析测定，得待测血浆样品的沃诺拉赞和内标物的色谱图，并按步骤(5)的回归方程计算，得到待测血浆样品中沃诺拉赞的血药浓度。