[发明专利]一种血浆中沃诺拉赞的定量检测方法

说明书

本发明属于沃诺拉赞检测技术领域，公开了一种血浆中沃诺拉赞的定量检测方法，包括以下步骤：(1)标准工作溶液的配制：沃诺拉赞工作溶液及内标工作溶液均在‑20℃下保存，备用；(2)校正标样的配制：分别加入空白血浆样品，混匀，配制成多个校正标样；(3)样品处理：等体积地取多个校正标样及待测血浆样品，分别加入步骤(1)中的内标工作溶液，分别加入乙腈，混匀，离心，取上清液，保存待用；(4)LC‑MS/MS分析测定；(5)标准曲线制作(6)定量分析：按照步骤(4)，等量取待测血浆样品对应的上清液，进行LC‑MS/MS分析测定。本发明的定量检测方法具备操作简单、分离效果好、定性准确、样品分析时间短及检测灵敏度高的特点。

技术领域

本发明属于沃诺拉赞检测技术领域，具体涉及一种血浆中沃诺拉赞的定量检测方法。

背景技术

与传统质子泵抑制剂兰索拉唑相比，沃诺拉赞(Vonoprazan)是通过竞争性、可逆的抑制质子泵中的K⁺而起作用，临床和动物实验表明，沃诺拉赞比PPI或H2受体阻滞剂起效更快，升高pH的作用更强，能迅速缓解消化道症状，离解后酶活性恢复，不良反应少，数项临床试验均证实了，沃诺拉赞对于糜烂性食管炎、预防及治疗胃、十二指肠溃疡，作为一线治疗方案根除幽门螺杆菌等均有显著的治疗作用，疗效高于兰索拉唑，不良反应小。沃诺拉赞亲脂性高、解离常数高，在酸性环境下，不需要酸活化，即可起效。沃诺拉赞对质子泵的抑制作用无需酸的激活，以高浓度进入胃中，首次给药便能产生最大的抑制效应，且可持续24小时。沃诺拉赞在酸中稳定，能迅速升高胃内pH值，发挥抑酸效果。在治疗剂量时沃诺拉赞对其他的酶影响很小，对机体生理功能影响小，安全性好，更易耐受。传统质子泵抑制剂(PPI)由CYP2C19代谢，而沃诺拉赞并不主要由CYP2C19代谢，药效及起效剂量在不同患者中的差异并不显著，能更好的满足患者的个体化用药方案。

富马酸沃诺拉赞片原研公司为武田薬品工業株式会社，原研药品未在国内上市，也没有国际公认的同种药物在国内上市。为了提高我国人民用药的可及性，减轻病人的经济负担，能用的起更便宜、质量与原研药相当的仿制药，因此，亟需提供沃诺拉赞的一种新的检测方法，可以快速定量检测口服仿制药后人体血浆或动物血浆中沃诺拉赞的血药浓度，了解相应的药代情况，以便仿制药的临床应用。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种血浆中沃诺拉赞的定量检测方法。

本发明所采用的技术方案为：

一种血浆中沃诺拉赞的定量检测方法包括以下步骤：

(1)标准工作溶液的配制：称取沃诺拉赞，加入甲醇配制成浓度为0.1～1mg·mL^-1的沃诺拉赞储备液，将所述沃诺拉赞储备液用体积比为1:1的乙腈水溶液稀释成浓度为2～1000ng·mL^-1的沃诺拉赞工作溶液；称取沃诺拉赞的内标物，加入体积比为1:1的甲醇水溶液配制成浓度为1～10mg·mL^-1的内标储备液，用体积比为1:1的乙腈水溶液稀释成1～10ng·mL^-1的内标工作溶液；所述沃诺拉赞工作溶液及所述内标工作溶液均在-20℃下保存，备用；

(2)校正标样的配制：取多个不同浓度的沃诺拉赞工作溶液，分别加入空白血浆样品，混匀，配制成多个校正标样，校正标样的浓度为0.1～50ng·mL^-1；

(3)样品处理：等体积地取多个校正标样及待测血浆样品，分别加入步骤(1)中的内标工作溶液，分别加入乙腈，混匀，离心，取上清液，保存待用；

(4)LC-MS/MS分析测定：等量取步骤(3)的多个校正标样对应的上清液，分别加入含0.2％甲酸的10mM乙酸铵水溶液，混匀，进行LC-MS/MS分析测定，得多个校正标样的沃诺拉赞和内标物的色谱图；