[发明专利]一种提取超长环状DNA的方法在审
| 申请号： | 201910182903.9 | 申请日： | 2019-03-12 |
| 公开（公告）号： | CN109880821A | 公开（公告）日： | 2019-06-14 |
| 发明（设计）人： | 张进平;张晓春;姜曼 | 申请（专利权）人： | 青岛安德贝生命科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 青岛中天汇智知识产权代理有限公司 37241 | 代理人： | 袁晓玲 |
| 地址： | 266000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明针对长片段DNA提取过程存在的DNA易水解、质量差、数量少、成本高的问题，提供一种提取超长环状DNA的方法，属于分子细胞生物学领域。包括以下步骤：将转化的细菌初始培养并制作克隆平盘，从过夜培养的平盘中挑取克隆并植入含有相应抗生素的培养液中，培养至生长平台前期；将培养液转移至离心管中离心去上清，收集细菌沉淀，再经过TE缓冲液悬浮、离心，彻底弃去上清；加入蔗糖TE缓冲液后，加热至98℃，2‑3分钟后迅速冷却；以转速21K x g离心10分钟后，小心收取上清于新试管内，向新试管内加入预冷的异丙醇和醋酸钠，离心后沉淀出初期DNA收获物，用70％乙醇洗去盐分和杂质后室温晾干。本发明操作简便，成本低，环境友好，可获取大量、超长的高质量DNA。 | ||
| 搜索关键词： | 培养液 环状DNA 试管 平盘 克隆 分子细胞生物学 长片段DNA 高质量DNA 环境友好 室温晾干 细菌沉淀 迅速冷却 醋酸钠 离心管 乙醇洗 异丙醇 质量差 蔗糖 预冷 植入 加热 抗生素 沉淀 悬浮 细菌 生长 收获 制作 转化 | ||
【主权项】：
1.一种提取超长环状DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将转化的细菌初始培养并制作克隆平盘，从过夜培养的平盘中挑取克隆并植入含有相应抗生素的培养液中，培养至生长平台前期；(2)将培养液转移至离心管中离心去上清，收集细菌沉淀，细菌沉淀再经过TE缓冲液悬浮、离心，彻底弃去上清；(3)加入蔗糖TE缓冲液后，加热至98℃，2‑3分钟后迅速冷却；(4)以转速21Kxg离心10分钟后，小心收取上清于新试管内，向新试管内加入预冷的异丙醇和醋酸钠，离心后沉淀出初期DNA收获物，用70％乙醇洗去盐分和杂质后室温晾干。
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