[发明专利]一种鸭呼肠孤病毒疫苗及其制备方法有效
| 申请号： | 201910147000.7 | 申请日： | 2019-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN109718370B | 公开（公告）日： | 2019-11-29 |
| 发明（设计）人： | 张毓金;严悌昆;谢秉超;黄淑芬;张桂平 | 申请（专利权）人： | 广东渔跃生物技术有限公司 |
| 主分类号： | A61K39/15 | 分类号： | A61K39/15;A61P31/14;C12N7/00;C12N7/02 |
| 代理公司： | 44416 广州科沃园专利代理有限公司 | 代理人： | 张帅<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 511500 广东省清远市清城区石角镇广州(*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种鸭呼肠孤病毒疫苗，其是在传代细胞系BHK‑21细胞上接种鸭呼肠孤病毒毒种得到的灭活疫苗。利用Reed‑Muench方法测定其病毒滴度可以稳定达到107.0‑107.5TCID50/0.1mL。抗原的稳定生产和高滴度是制备疫苗最关键因素,用BHK‑21细胞进行鸭呼肠孤病毒增殖其病毒滴度是常规鸭胚法及原代细胞法的10倍以上，如采用生物反应器进行病毒增殖，其病毒滴度可以达到100倍水平。本专利公开的鸭呼肠孤病毒灭活疫苗，产量高，品质稳定，免疫鸭能产生高水平血清中和抗体，免疫效果好，具有巨大的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 呼肠孤病毒 病毒滴度 呼肠孤病毒疫苗 灭活疫苗 制备 传代 血清中和抗体 生物反应器 细胞 病毒增殖 关键因素 免疫效果 稳定生产 原代细胞 高滴度 免疫鸭 抗原 毒种 鸭胚 增殖 接种 疫苗 应用 | ||
【主权项】：
1.一种鸭呼肠孤病毒疫苗的制备方法，特征在于，/n包括如下步骤：/n(1)BHK-21细胞的传代与培养：将BHK-21细胞，用胰酶消化分散，加入含双抗的6%新生牛血清的DMEM培养液在微载体反应器中37℃、5%CO2培养至细胞单层后，弃去原培养液，再用含有2mM的谷氨酰胺、0.2mM的N-N-二乙基-1-4-苯二胺的无血清DMEM培养液清洗细胞，用于鸭呼肠孤病毒接种；/n(2)病毒的接种和培养：将鸭呼肠孤病毒毒种按终体积1:500接种到步骤①制备的细胞，并在37℃吸附45分钟后吸弃病毒液，在用1.5%新生牛血清的DMEM培养液于37℃、5%CO2培养至细胞，出现明显病变时终止；/n(3)病毒的病毒收集、浓缩、纯化：将上述接种的病变细胞冻融，离心后收集上清液得到病毒原液；通过超滤浓缩上述病毒液即为制苗病毒液；/n(4)病毒灭活：采用0.1%福尔马林灭活病毒，即为疫苗抗原；/n(5)使用疫苗抗原配置疫苗制剂。/n
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