[发明专利]一种蜂蜜中黄酮类成分的含量测定方法

摘要

本发明提供一种蜂蜜中黄酮类成分的提取分析方法，所述黄酮类成分为槲皮素、山奈酚、异鼠李素的一种或两种以上的混合，所述方法包括为：取蜂蜜样品与纯水混合后，用超声萃取仪萃取，得到的混合溶液经离心后，取上清液作为蜂蜜提取液；将蜂蜜提取液与含吸附剂的分散溶液涡旋混合后，经固相萃取仪弃去滤液，取下含吸附剂的有机滤膜，用洗脱溶剂洗脱，收集滤液，离心取上清液装入液相小瓶，用高效液相色谱仪对分析物进行检测分析。本发明是采用蟹壳粉作为吸附剂，结合分散微固相萃取技术和高效液相色谱技术，来富集并检测食品蜂蜜中黄酮类成分含量的新方法。相比于传统方法，本发明具有更高的灵敏度，且省时、简便、环保，提取过程中消耗极少的有机试剂，实验人员在操作验过程中更安全。

主权项

1.一种蜂蜜中黄酮类成分的含量测定方法，所述黄酮类成分为槲皮素、山奈酚或异鼠李素的一种或两种以上的混合，其特征在于：所述方法包括以下步骤：(1)制备蜂蜜提取液：将蜂蜜样品溶于纯水中得到浓度为0.1‑1.0g/mL的蜂蜜水溶液，将所述的蜂蜜水溶液超声10‑40min后，然后在4000‑13000rpm条件下离心5‑15min取上清液，然后将所述的上清液用孔径为0.22μm的滤膜过滤，取滤液即为蜂蜜提取液；(2)配制十二烷基硫酸钠‑吸附剂分散液：将十二烷基硫酸钠与吸附剂混合，加入纯水至十二烷基硫酸钠终浓度为10‑25mM，超声2‑15min混合均匀，配制得到吸附剂浓度为0.05‑0.40mg/mL的吸附剂分散液；所述吸附剂为蟹壳粉；所述的十二烷基硫酸钠与吸附剂的质量比为50：1；(3)向步骤(1)所述蜂蜜提取液中加入步骤(2)所述的吸附剂分散液，加水稀释，配成吸附剂浓度为1‑8μg/mL混合溶液，并调节溶液pH至3‑11，然后将所述的混合溶液涡旋1～8min，过滤，所得固体用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，即为富集样液，4000‑13000rpm离心5‑20min后，取上清液用高效液相色谱进行采样分析，得到富集样液中黄酮类成分的提取色谱图；所述洗脱剂为乙腈、甲醇、乙醇或丙酮；所述的高效液相色谱分析的条件为：色谱柱：ZORBAX SB‑C₁₈色谱柱(5μm,4.6×250mm)，进样量：10μL，柱温：35℃，流速1mL/min，流动相：体积比为55:45的甲醇和体积分数为0.4％的磷酸水的混合液，等度洗脱12min；(4)将步骤(3)所得富集样液的各成分的色谱图中色谱峰的峰面积值分别代入槲皮素、山奈酚和异鼠李素的标准曲线，计算得到蜂蜜中槲皮素、山奈酚、异鼠李素的含量。