[发明专利]一种蜂蜜中黄酮类成分的含量测定方法

权利要求书

1.一种蜂蜜中黄酮类成分的含量测定方法，所述黄酮类成分为槲皮素、山奈酚或异鼠李素的一种或两种以上的混合，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

(1)制备蜂蜜提取液：将蜂蜜样品溶于纯水中得到浓度为0.1-1.0g/mL的蜂蜜水溶液，将所述的蜂蜜水溶液超声10-40min后，然后在4000-13000rpm条件下离心5-15min取上清液，然后将所述的上清液用孔径为0.22μm的滤膜过滤，取滤液即为蜂蜜提取液；

(2)配制十二烷基硫酸钠-吸附剂分散液：将十二烷基硫酸钠与吸附剂混合，加入纯水至十二烷基硫酸钠终浓度为10-25mM，超声2-15min混合均匀，配制得到吸附剂浓度为0.05-0.40mg/mL的吸附剂分散液；所述吸附剂为蟹壳粉；所述的十二烷基硫酸钠与吸附剂的质量比为50：1；

(3)向步骤(1)所述蜂蜜提取液中加入步骤(2)所述的吸附剂分散液，加水稀释，配成吸附剂浓度为1-8μg/mL混合溶液，并调节溶液pH至3-11，然后将所述的混合溶液涡旋1～8min，过滤，所得固体用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，即为富集样液，4000-13000rpm离心5-20min后，取上清液用高效液相色谱进行采样分析，得到富集样液中黄酮类成分的提取色谱图；所述洗脱剂为乙腈、甲醇、乙醇或丙酮；

所述的高效液相色谱分析的条件为：色谱柱：ZORBAX SB-C₁₈色谱柱，进样量：10μL，柱温：35℃，流速1mL/min，流动相：体积比为55:45的甲醇和体积分数为0.4％的磷酸水的混合液，等度洗脱12min；

(4)将步骤(3)所得富集样液的各成分的色谱图中色谱峰的峰面积值分别代入槲皮素、山奈酚和异鼠李素的标准曲线，计算得到蜂蜜中槲皮素、山奈酚、异鼠李素的含量；

步骤(2)中所述蟹壳粉按以下方法制备：

蟹壳用纯净水洗涤后，置于60～70℃的烘箱中干燥至恒重；然后将干燥好的蟹壳粉碎成粉末并过100目筛，然后将过筛后的蟹壳粉末在100℃下，用质量分数为20％的氢氧化钠水溶液处理1小时，然后用纯净水洗涤后，置于60～70℃的烘箱中干燥12小时，将干燥后的蟹壳粉末再次粉碎并过200目筛，即得作为吸附剂的蟹壳粉末。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于：所述的槲皮素、山奈酚和异鼠李素的标准曲线按照如下方法进行制备：

a、以甲醇为溶剂，以槲皮素为对照品配制浓度范围为0.27-10⁴ng/mL的槲皮素对照品溶液，按照步骤(3)中所述富集样液的同样条件用高效液相色谱进行检测，获得槲皮素对照品的色谱图，以所述的槲皮素对照品溶液的色谱图中色谱峰的峰面积为纵坐标，以槲皮素对照品的浓度为横坐标，制作槲皮素对照品标准曲线；

b、将步骤a的对照品槲皮素分别换成山奈酚和异鼠李素，按步骤a所述的方法分别制作山奈酚对照品标准曲线以及异鼠李素对照品标准曲线。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(3)中，所述吸附剂浓度为：1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL或8μg/mL。

4.如权利要求1所述方法，其特征在于：所述的pH通过1M甲酸或1M氢氧化钠进行调节。

5.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(3)中，所述涡旋的时间为：1min、2min、4min、6min或8min。

6.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(3)中，所述pH为：3、5、7、9或11。

7.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(3)中，所述洗脱剂为甲醇。

8.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤(3)中，所述洗脱剂体积为80μL、100μL、150μL或200μL。