[发明专利]一种构建RBM17基因敲除的间充质干细胞细胞系的方法在审
| 申请号： | 201910099337.5 | 申请日： | 2019-01-31 |
| 公开（公告）号： | CN109777780A | 公开（公告）日： | 2019-05-21 |
| 发明（设计）人： | 齐国光;鲁南;马立新 | 申请（专利权）人： | 上海拉德钫斯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/90 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 陈欢 |
| 地址： | 上海市青浦区*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供一种构建RBM17基因敲除的间充质干细胞细胞系的方法，包括以下步骤：(1)构建用于表达SEQ ID NO：6所示的CREnhancer 2.0基因的质粒；(2)构建用于表达sgRNA的质粒；(3)将步骤(1)的质粒提前导入到间充质干细胞中，筛选得到阳性细胞后，再转入步骤(2)的质粒。本发明筛选并优化获得了最佳的sgRNA，使用了新的增效蛋白CREnhancer 2.0，在间充质干细胞中，构建了RBM17基因敲除的细胞系，基因编辑效率高，传代稳定。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 间充质干细胞 质粒 基因敲除 传代 筛选 阳性细胞 增效蛋白 基因 转入 优化 | ||
【主权项】：
1.一种构建RBM17基因敲除的间充质干细胞细胞系的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建用于表达SEQ ID NO：6所示的CREnhancer 2.0基因的质粒；(2)构建用于表达sgRNA的质粒；(3)将步骤(1)的质粒提前导入到间充质干细胞中，筛选得到阳性细胞后，再转入步骤(2)的质粒。
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