[发明专利]Au@Fe3

摘要

本发明涉及一种Au@Fe3O4MNPs‑Ab2纳米酶检测探针的制备方法及检测多组分抗原的方法,本发明首先合成的Au@Fe3O4纳米粒子探针，成功将其应用于构建纳米酶信号放大的化学发光阵列免疫传感器。其次，将不同的捕获抗体固定于免疫阵列传感器不同的固相界面，然后分别通入抗原样品和Au@Fe3O4MNPs‑Ab2纳米信号放大探针，在线温育形成稳定的夹心免疫反应复合物，通入化学发光底物后所产生的光信号由电荷耦合CCD相机收集，实现了纳米酶催化信号放大的多组分抗原化学发光免疫检测，适用于多种分析物抗原的同时检测。该分析方法具有检测成本低、样品消耗少、耗费时间短、稳定性好、操作简单等优点，为家禽疾病的临床检测提供了一个深具前景的检测平台。

主权项

1.一种Au@Fe₃O₄MNPs‑Ab₂纳米酶检测探针的制备方法，包括以下步骤：A1：制备Au@Fe₃O₄纳米粒子：将体积比为（1～1.5）：20的油酸与十八碳烯混合，在N₂流下加热至120°C保温20 min，在N₂层下向混合液中注入Fe(CO)₅，使Fe(CO)₅在上述混合液中的浓度为35～40mg/mL,搅拌5 min后，将体积为油酸体积一半的油胺注入反应后的混合物中，然后向混合物中10—15倍质量的Au纳米颗粒，混合均匀后，将混合液加热至300～310 °C回流45 min，冷却至室温后，再加入异丙醇将颗粒分离，分离出离散的Au纳米颗粒，将分离出Au纳米颗粒后的得到的二联体Au@Fe₃O₄纳米粒子分散到己烷中，使Au@Fe₃O₄的分散浓度为5 mg/mL；A2：制备Au@Fe₃O₄MNPs‑Ab₂纳米酶检测探针：向步骤A1制得的Au@Fe₃O₄ 纳米颗粒的溶液按体积比为30：（1～1.5）加入浓度为100～200μg/mL二级抗体Ab₂，缓慢搅拌2h，再在4 °C下以10000 rpm 离心30 min，以去除过量Ab₂捕获抗体；将离心液沉淀后分散于于0.01M 的磷酸盐缓冲液中；本步上述过程至少重复两次，最终得到分散浓度为5 mg/mL 的Au@Fe₃O₄MNPs‑Ab₂纳米酶检测探针悬浮分散液。