[发明专利]Au@Fe3

权利要求书

1.一种Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂纳米酶检测探针的制备方法，包括以下步骤：

A1：制备Au@Fe₃O₄纳米粒子：将体积比为（1～1.5）：20的油酸与十八碳烯混合，在N₂流下加热至120°C保温20 min，在N₂层下向混合液中注入Fe(CO)₅，使Fe(CO)₅在上述混合液中的浓度为35～40mg/mL,搅拌5 min后，将体积为油酸体积一半的油胺注入反应后的混合物中，然后向混合物加入质量为Fe(CO) ₅的10—15倍的Au纳米颗粒的分散体，混合均匀后，将混合液加热至300～310 °C回流45 min，冷却至室温后，再加入异丙醇将颗粒分离，分离出离散的Au纳米颗粒，将分离出Au纳米颗粒后的得到的二联体Au@Fe₃O₄纳米粒子分散到己烷中，使Au@Fe₃O₄的分散浓度为5 mg/mL；

A2：制备Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂纳米酶检测探针：向步骤A1制得的Au@Fe₃O₄纳米颗粒的溶液按体积比为30：（1～1.5）加入浓度为100～200μg/mL二级抗体Ab₂，缓慢搅拌2h，再在4 °C下以10000 rpm 离心30 min，以去除过量Ab₂捕获抗体；将离心液沉淀后分散于0.01M 的磷酸盐缓冲液中；本步上述离心和分散过程至少重复两次，最终得到分散浓度为5 mg/mL 的Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂纳米酶检测探针悬浮分散液。

2.根据权利要求1所述Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂纳米酶检测探针的制备方法，所述Au纳米颗粒的分散体的制备方法为：将HAuCl₄·3H₂O加入到四氢化萘中配制浓度为2.5～3 mmol/100mL的溶液，再加入体积为四氢化萘体积1/10 的油胺配制成红色溶液，然后将该溶液在0～70 °C加热5-6h ，再冷却至室温，将乙醇加入到溶液中，通过离心分离金颗粒，并用乙醇洗涤，然后再分散在己烷中，制得分散浓度为10mg/mL的Au纳米颗粒的分散体。

3.一种基于权利要求1或2的Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂纳米酶检测探针的化学发光阵列免疫传感器检测多组分抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：

B1：利用丝网印刷技术于硅烷化载玻片印制多点位检测的反应阵列；

B2：将壳聚糖溶液等体积混合不同待分析物的捕获抗体滴涂于B1步丝网印刷的反应阵列的各点位；再用封闭缓冲液封闭活性位点，制得阵列免疫传感器；

B3：依次向免疫阵列的各点位中分别滴加5μL的与B2步各点位对应的待检测抗原和Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂纳米酶检测探针，温育后形成稳定夹心免疫复合物，缓冲液清洗吹干后加入化学发光底物；

B4：用CCD照相机积分收集发光信号，检测各发光信号的光强度，根据各发光信号的光强度与抗源浓度的线性关系，计算原抗原样品的浓度。

4.根据权利要求3所述的基于Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂纳米酶检测探针的化学发光阵列免疫传感器检测多组分抗原的方法，其特征在于，步骤B1中，丝网印刷的反应阵列各检测点位的微孔直径为2mm，边缘的点位距载玻片边缘的间距为4～6mm，微孔外缘为绿色的具有疏水作用的绝缘油漆。