[发明专利]稳定表达FGF-1蛋白细胞株的构建方法在审
| 申请号： | 201910081720.8 | 申请日： | 2019-01-28 |
| 公开（公告）号： | CN109735568A | 公开（公告）日： | 2019-05-10 |
| 发明（设计）人： | 郭建军;田莹;檀军;赵帅;郑玉林;陈緖美;尹志勇 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;C12N15/12 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 李亮;程新敏 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种稳定表达FGF‑1蛋白细胞株的构建方法。在pLenti‑CMV‑Gag‑Mcherry‑Puro载体的Not I和Avr II多克隆位点处插入FGF‑1基因，用构建好的pLenti‑CMV‑FGF‑1‑Emcherry‑Puro重组质粒与病毒包装质粒共转染293T细胞，培养、出毒、收取病毒上清、过滤得重组慢病毒液。将包装好的重组慢病毒感染293T细胞，通过嘌呤霉素筛选及鉴定，得稳定表达FGF‑1蛋白细胞株。本发明利用重组慢病毒系统制备一种融合标签蛋白并能稳定表达FGF‑1蛋白的细胞株，该细胞株为研究FGF‑1蛋白的生物学功能提供一个很好的工具。 | ||
| 搜索关键词： | 稳定表达 重组慢病毒 蛋白细胞 构建 蛋白 细胞株 多克隆位点 生物学功能 细胞 病毒包装 融合标签 系统制备 质粒共转 重组质粒 嘌呤霉素 过滤 筛选 病毒 感染 基因 研究 | ||
【主权项】：
1.一种稳定表达FGF‑1蛋白细胞株的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：1)FGF‑1基因的扩增；2)将FGF‑1基因与载体pLenti‑CMV‑Gag‑Mcherry‑Puro连接，构建重组慢病毒表达质粒pLenti‑CMV‑FGF‑1‑Emcherry‑Puro；3)将重组慢病毒表达质粒pLenti‑CMV‑FGF‑1‑Emcherry‑Puro与慢病毒包装质粒psPAX2及pVSV‑G共转染293T细胞，48h后，收集上清，72000×g离心4h获得高度浓缩的慢病毒颗粒；4)将包装好的重组慢病毒CMV‑mcherry‑LVP转染293T细胞，通过嘌呤霉素筛选阳性细胞株，对阳性细胞株进行细胞免疫荧光鉴定，获得稳定表达FGF‑1蛋白细胞株。
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