[发明专利]一种从辣木籽中提取具有水解活性蛋白酶的方法

摘要

本发明提供了一种从辣木籽中提取具有水解活性蛋白酶的方法，属于天然蛋白酶提取技术领域。通过发芽技术提高辣木籽的蛋白酶种类和含量,然后根据辣木籽蛋白质组学解析，得到上调表达且具有水解活性的蛋白酶的信息，用于指导后续提取。本发明提供的提取方法不仅能够提取得到多种具有水解活性的蛋白酶，并且提取得到的蛋白酶含量高、酶活性强。从发芽辣木籽提取得到的8种辣木籽蛋白酶相比从干辣木籽中提取的蛋白酶含量相应提高了10％～21％，其中2种蛋白酶相比干辣木籽蛋白酶相应水解活力提高了8.0％～9.9％。采用本发明提供的的方法，避免了传统蛋白质分离方法的盲目性、繁琐性和工作量大的问题，具有操作简便重复性好的特点。

主权项

1.一种从辣木籽中提取具有水解活性蛋白酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)从发芽辣木籽和干辣木籽中分别进行蛋白质非标记相对定量分析，筛选干辣木籽总蛋白和发芽辣木籽总蛋白之间的差异蛋白；发芽辣木籽的芽长为10～15cm，发芽辣木籽的质量为12.57～13.09g/15粒；干辣木籽的质量为4.31～4.53g/15粒；2)统计步骤1)所述差异蛋白中上调表达的蛋白质，将得到的上调表达的蛋白质进行GO功能注释，得到具有水解活性的蛋白酶；3)采用盐法提取发芽辣木籽蛋白酶，得到辣木籽蛋白酶盐提液；4)根据步骤2)中筛选得到具有水解活性的蛋白酶的PI值，调整步骤4)中辣木籽蛋白酶盐提液的pH值至所述PI值，收集蛋白酶沉淀，复溶，脱盐，得到辣木籽蛋白酶粗提液；5)根据步骤2)中筛选得到具有水解活性的蛋白酶的分子量，选择超滤膜对所述辣木籽蛋白酶粗提液中的蛋白进行超滤截留，收集目标分子量的蛋白酶，得到具有水解活性蛋白酶。