[发明专利]一种体内筛选的剪切RNA的锤头状核酶在审
| 申请号： | 201910030366.6 | 申请日： | 2019-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN109609505A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 唐卓;黄鑫;董娟 | 申请（专利权）人： | 中国科学院成都生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 610041 *** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种体内筛选核酶的新方法，以及通过该方法筛选得到的具有催化RNA剪切活性的核酶。该体内筛选方法以毒蛋白ibsC为报告基因，通过体内转录得到的核酶对ibsC对应的mRNA的剪切作用控制毒性蛋白的表达以影响细胞存活，从而筛选获得活性核酶。该方法无需复杂的体外筛选步骤，最大程度降低无活性的RNA序列对筛查成功率的影响，为核酶进化提供了简单、高效的通用细胞内筛选平台。该方法筛选获得的核酶与底物的作用方式主要为分子间剪切模式，适用于胞外、原核细胞内、真核细胞内针对目标底物分子的位点特异性的催化剪切，实现对选定基因的表达下调。 | ||
| 搜索关键词： | 筛选 核酶 体内 剪切 催化 分子生物学技术 锤头状核酶 位点特异性 转录 报告基因 表达下调 毒性蛋白 活性核酶 剪切模式 剪切作用 目标底物 体外筛选 影响细胞 原核细胞 真核细胞 作用方式 毒蛋白 底物 筛查 成功率 存活 进化 细胞 基因 通用 | ||
【主权项】：
1.一种细胞内筛选催化分子间剪切核酶的策略，其特征在于，以细胞为筛选载体，毒蛋白IbsC为报告基因，构建含有IbsC毒性蛋白基因和核酶DNA文库的质粒文库，将质粒文库转入细胞后，通过核酶对毒性蛋白mRNA的剪切作用控制毒性蛋白的表达，进而影响细胞存活，从而筛选获得活性核酶。
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