[发明专利]一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法

摘要

本发明公开了一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图的建立方法。该方法具有简便、稳定、精密度高、重现性好等优点；用该方法还能较为全面地反映黑骨藤有效部位群中所含化学成分的种类与数量，进而对其质量进行整体描述和评价。且用该方法检测到的黑骨藤有效部位群指纹图谱化学成分相对较多、各特征峰高度比例适中，基线较平稳，分离度、峰形均较好，柱效较高。

主权项

1.一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)混合对照品溶液的制备：取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C标准品，用甲醇定容为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C浓度均为0.005‑0.015g·mL^‑1混合对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：精密称定黑骨藤粗粉100.0g，用乙醇回流提取，抽滤，浓缩，用蒸馏水定容1000mL，得样品溶液；精密称取D101大孔吸附树脂装入层析柱，蒸馏水冲洗至层析柱下端流出液体清澈无色后，将样品溶液上样进行吸附，待吸附完全后以蒸馏水洗脱，然后以乙醇洗脱，收集层析柱流出的乙醇部分，浓缩，烘干，研磨，得黑骨藤有效部位群粉末；精密称取黑骨藤有效部位群粉末，用甲醇定容，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，得供试品溶液；(3)指纹图谱的制作：色谱条件：色谱柱：XtimateC₁₈，4.6×250mm，5μm；流动相：乙腈为A相，0.1％磷酸水溶液为B相；梯度洗脱，检测波长为360nm，流速为1mL·min^‑1，柱温38℃，进样量10μL；记录色谱图得到黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图谱；(4)标准指纹谱图的确认：按照上述提供的方法，对多批次黑骨藤有效部位群建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较确定了24个共有峰，这些共有峰构成了黑骨藤有效部位群的指纹特征，作为黑骨藤有效部位群的标准指纹图谱。